客服热线
15805933710
地址:厦门市集美大道1300号
电话:15805933710
联系人:许先生
QQ:1974707632
微信:15805933710
邮件:purimag@139.com
1. 概述
PuriMagTM G-DADPA活化的磁性纳米粒子是均匀的,基于亲水聚合物包覆的超顺磁珠,表面涂有高密度的DADPA(二氨基二丙胺,Diaminodipropylamine)官能团。 类固醇、染料、药物等是一类小分子,由于缺乏或难以获得易反应的伯胺、巯基、羰基和其它常见偶联基团,因此难以或不可能通过当前的固定方法固定。 但是,这些小分子可能会通过在曼尼希反应(Mannich reaction)中与甲醛和胺缩合的活性氢而被固定在DADPA封端的磁珠上。PuriMagTM G-DADPA磁珠可固定化具有活性氢的类固醇、药物和化学化合物,以用于亲和纯化。
特点与优势:
w 高结合能力;
w 快速、高效的偶联;
w 亲水性长臂间隔子,可将空间位阻和非特异性结合降至最低。
偶联反应方程:
能发生Mannich Reaction的常见活泼氢类型:
2. 产品信息
Product Specifications
Description
Polymer coated Fe3O4 nanoparticles
Particle Size
200 nm
Number of Beads
~1.7×1010 beads/mg
Matrix
Proprietary polymer
Functional group
DADPA group
Group density
~300 µmole / g of Beads
Magnetization
60~70 EMU/g
Formulation
10 mg/ml suspension in 50% acetone
Stability
pH 3.5~10, 4~80 ℃, most organic solvents
Storage
1 year at 4~8 ℃. Do not freeze.
3. 使用方法
注意:以下方案是将含胺配体与PuriMagTM G-DADPA封端的磁珠偶联的示例。强烈建议进行滴定,以优化用于每种单独应用的磁珠量。该协议可相应地按比例放大和缩小。
偶联缓冲液或配体不应包含任何氨基(例如Tris)或甲酰基。由于溶液相聚合,含氨基配体的偶联效率非常低。
A. 所需材料
1)磁力架(用于手动操作):用于容纳12个单独的1.5~2ml离心管(Mrack02);用于容纳2个50 ml离心管或2个15 ml离心管(目录号Mrack03)
2)偶联缓冲液:0.1 M MES,0.15 M NaCl,pH 4.7
3)洗涤缓冲液:0.1 M Tris,pH 8.0
4)偶联试剂: 37% formaldehyde
B. 偶联方法
B-1.样品制备
如果可溶,将1-10mg配体溶于1ml偶联缓冲液中。如果不溶,则将其溶于0.5 ml 100%乙醇中,然后添加0.5 ml偶联缓冲液制成50%乙醇/缓冲液。 (注意:如果使用乙醇进行偶联,则在添加样品之前必须用50%乙醇洗涤磁珠。)
B-2. PuriMagTM磁珠的制备
注意:将PuriMagTM磁珠按10 mg/ml悬浮在20%乙醇水中,剧烈涡旋分散磁珠并储存在4 ℃。使用前混匀PuriMagTM磁珠。
1) 将10mg磁珠转移至EP管中。
2) 将EP管置于磁磁力架上1min,吸弃上清液,用1ml偶联缓冲液重新悬浮磁珠。
3) 重复步骤2三次。
B-3. 偶联
1)将准备好的样品和100μl偶联试剂添加到洗涤过的PuriMagTM磁珠中,充分混合,并在38~60℃下连续旋转孵育48小时以上。
注意:用户应凭经验确定最佳的偶联反应时间和温度。
2)用1ml偶联缓冲液洗涤磁珠四次,然后用纯水洗涤两次。
注意:如果在50%乙醇中偶联了不溶性配体,则应先用50%乙醇洗涤珠子3次,然后用去离子水洗涤两次,然后用100%乙醇洗涤两次,最后用去离子水洗涤两次
3)将磁珠重悬在含0.05%叠氮化钠的缓冲液中,并保存在4℃下。
C. 一般亲和纯化方案
注意:设计通用的纯化DNA或RNA的方案相对简单,因为核酸的生化特性相对一致。但是,设计一种通用的亲和纯化方案非常困难,因为每种蛋白质都有不同的组成和结构。为了获得最佳结果,每个用户都必须为各个应用程序确定最佳工作条件。
1)将最适量的磁珠转移到离心管中。磁分离1~3分钟,除去上清液。
注意:强烈建议根据粗样品中目标蛋白的量进行滴定,以优化用于每种应用的磁珠的量。所用磁珠过多会导致较高背景,而所用磁珠太少则会导致较低产量。每mg的磁珠通常结合1~20 μg的目标蛋白。
2)取下离心管,用5倍磁珠体积的PBS缓冲液悬浮30秒。磁分离1~3分钟,除去上清。
3)重复步骤2两次
4)将洗涤过的PuriMagTM磁珠加入含有目标蛋白的粗样品中,并在室温或所需温度下孵育1~2小时(较低的温度需要更长的孵育时间)。
5)用5倍磁珠体积的PBS缓冲液或1M NaCl充分洗涤磁珠,直到280 nm洗脱液的吸光度接近背景水平(OD 280 <0.05)。