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【产品介绍】
琼脂糖凝胶电泳是一种用于分离纯化DNA片段的重要分子生物学实验技术。磁珠法DNA胶回收试剂盒是普睿迈格生物科技有限公司最新研制的一种DNA胶回收试剂盒。本试剂盒中的试剂盒采用了独特的缓冲液溶解由TAE或TBE电泳缓冲液制备的琼脂糖凝胶块,从凝胶块中溶解的DNA片段可以特异性地吸附到硅基化磁珠的表面,在磁场的作用下,携带DNA的磁珠向磁铁方法进行定向移动和聚集,与剩余的其它杂质完全分开。通过简单的两次洗涤,可以将杂质完全洗尽。最后用水或低盐缓冲液将结合在磁珠上的DNA洗脱下来,洗脱下来的 DNA片段纯度高,完整性好,可直接用于连接反应、PCR 扩增、DNA测序等各种分子生物学实验。本试剂盒可以采用手工操作进行,也可以经对自动化提取设备进行参数调试后,用于自动化或半自动化的工作平台。
【特点】
l 磁珠之间吸附量差异极小,可重复性好。
l 可选择手动或自动操作方式。
l 操作简单,无需离心或过滤等耗时操作。
l 可实现高通量
【保存方法及注意事项】
请将试剂盒中的PuriMag Beads置于2-8℃保存,其余试剂室温保存,有效期详见包装。
l 严禁冰冻、离心。冰冻、离心可能会对磁珠造成不可逆的损害。
l 磁珠长期放置后会聚集成团,从而使磁珠表面积减小,降低样品回收得率,使用前一定要涡旋振荡彻底混匀磁珠(通常需涡旋振荡20秒)。
【试剂盒组成】
组分
100次
保存
MG Buffer
30 ml
常温
Wash buffer
75%乙醇(用户自备)
Elution buffer
5 ml
PuriMag bead
2 ml
2-8℃
异丙醇
用户自备
DNA浓度及纯度检测 :(1)得到的基因组DNA片段大小与样品保存时间、操作过程中剪切力等因素有关,所得DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度和纯度。 (2)DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260=1相当于大约50ng/ul双链DNA,40ng/ul单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7~1.9,如果洗脱时使用去离子水,比值会偏低,因为pH和离子会影响吸光度,并不表示纯度低。
【操作步骤】
切胶→
1) 长波紫外灯照射下快速从琼脂糖凝胶中切下目的条带(尽量去除多余琼脂糖胶),称重后,将其放入干净的1.5 ml离心管中。
溶胶→
2) 向胶块中加入1:1体积的MG buffer(体积:重量)(比如,100 mg的凝胶中加入100 μl的MG buffer。注:对于浓度大于2%的琼脂糖凝胶,向胶块中加入2:1体积的MG buffer)。将凝胶混合物在65 ℃条件下放置10 min,间或混匀直至胶块完全溶解。
结合→
3) 向离心管中加入20 μl PuriMag beads(磁珠摇匀后加入),移液枪吹打混匀后室温静置3 min,再吹打混匀1次,静置3 min。磁分离20 s,吸弃上清。
清洗→
4) 向离心管中再加入步骤2同样体积的MG buffer,移液枪吹打混匀后室温静置3 min,于磁力架上磁分离20 s,吸弃上清。
5) 向离心管中加入700 ul Wash buffer,移液枪吹打混匀后室温静置2 min左右,置于磁力架上磁分离20 s,吸弃上清。重复该步骤一次。倒置离心管2-3 min,室温晾干5 min,让残留乙醇挥发干净,以免影响后续实验。
洗脱→
6) 向离心管中加入10-50 ul Elution buffer(Elution buffer在65-70 ℃中预热后洗脱效果更好,减小洗脱体积或多次洗脱可增大DNA浓度),移液枪吹打混匀1-2 min,于磁力架上磁分离20 s,小心吸走上清液放入新离心管中,即为提取的质粒DNA,可存放于2-8 ℃,长期存放需放置于-20 ℃。