提取质量评估——纯度、产量和完整性指标

       未经质量验证就将样本送入昂贵的文库制备或诊断检测，是实验失败的可预防原因。

分光光度比值（A260/A280 和 A260/A230）

       A260/A280的比例表示蛋白质污染：纯DNA读数为~1.8;纯RNA读数为~2.0。DNA值低于1.7则提示残留蛋白，需要进一步清理步骤。A260/A230比值为更灵敏的抑制剂筛选：数值必须接近2.0。低于1.5的浓度则确认了鸟钍、酚或有机溶剂的残留——这些污染物在230纳米处吸收，会抑制下游酶。

荧光定量与分光光度法

       260 nm的紫外吸收能检测所有吸收紫外线的物种：RNA、游离核苷酸、降解片段和化学污染物——而不仅仅是完整且可用的双链DNA。使用夹层染料的荧光测定法仅结合双链DNA，从而对聚合酶实际可用的模板进行更精确的测量。对于任何输入质量直接控制结果的应用——文库制备、数字PCR、临床检测——荧光定量是更可靠的方法。

NGS应用中的DNA完整性评估

       视觉琼脂糖凝胶电泳提供快速的首次检测：紧密的高兆波带表示基因组DNA完整;涂抹信号会导致退化。对于定量的片段尺寸分布，片段分析仪或生物分析仪能提供精确的数据。对于PacBio长读序列测序，基因组质量数（GQN）必须达到≥7.0，即≥70%的片段超过10 kb。RNA完整性在表达分析中使用前，需通过琼脂糖凝胶（完整的28S和18S核糖体RNA带，比例为2：1）或生物分析仪RNA完整性数（RIN）进行验证。

度规	乐器	可接受的射程	未达标表示	纠正措施
A260/A280	纳米滴/分光光度计	1.8（DNA）;2.0（RNA）	<1.7：蛋白质污染	额外的降水或清理步骤
A260/A230	纳米滴/分光光度计	≥2.0	<1.5：混能盐/酚的转移	额外的乙醇洗涤剂;延长干旋
荧光率	量子比特 / 板读器	应用依赖	低读数与纳米滴：降解或受污染的样品	重新提取;通过凝胶评估完整性
GQN（长读NGS）	片段分析仪	≥7.0（PacBio Revio）	<7.0：HMW碎片不足	切换到磁珠法;避免使用离心剪切
RIN（RNA）	生物分析仪	表达式分析≥7	<7：RNA降解	检查RNase污染情况;优化裂解速度