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订购信息
货号
规格
MS-CBX001
1 ml
MS-CBX010
10 ml
1. 产品描述
MagStart-Carboxyl 是由超多孔聚合物网络组成的磁性聚合物微载体。通过与各种化学偶联剂对微粒（或生物制品）进行化学活化来共价偶联生物配体。这可以通过在单步偶联反应中使用EDC[1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺]和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS或Sulfo-NHS）试剂的水性碳二亚胺介导的活化过程来实现，或在两步反应中，在微粒上的羧基残基活化后加入含胺分子。MagStart微球技术的进步使生物分子可在整个微粒空间渗透和结合，为生物分子的固定化提供了极高的结合能力。
MagStart-Carboxyl微粒极高的官能团密度为生物分子偶联提供了高浓度的反应位点。MagStart-Carboxyl的高结合载量允许减少高活性功能微粒的体积来实现实验方案小型化，进而最大限度地减少所需试剂的体积，从而允许以更小的体积应用固定化配体。MagStart可快速磁分离（<10 秒），通过磁压缩减少了洗涤和洗脱过程中颗粒间隙，从而提高了效率和回收率，强磁性还可防止微粒的意外丢弃而避免样品损失。
Product Specifications
Description
Iron oxide-containing magnetic polymer microspheres
Application
Immobilization of proteins, peptides, enzymes, antibodies and other ligands
Matrix
Proprietary polymer
Core
Iron (II, III) oxide (Magnetite)
Functional group
Carboxylic acid (COOH)
Binding capacity
≥20 mg/ml (BSA)
Particle Size
~5–10 μm
Formulation
20 mg/ml suspension in 20% ethanol
Stability
pH 3.5~10, 4~60 ℃
Storage
Store at 4~8⁰C until expiry date on label. DO NOT FREEZE!
注意：不当储存、微粒干燥、细菌污染或离心回收可能导致容量/性能的不可逆损失。使用前应充分混匀。
2. 偶联流程
2.1. 样品制备
偶联缓冲液的离子强度和pH值是有效固定化配体的重要考虑因素。偶联缓冲液应不含伯胺类化合物（例如Tris）。请仔细阅读说明指南，以确保您使用的是合适的耦合缓冲器。如果要偶联的样品中含有可能干扰偶联反应的污染物，如盐、糖、稳定剂或化合物，则应通过脱盐、超滤或类似技术从样品中去除这些成分。NHS-EDC活化羧基微粒的偶联效率取决于配体浓度，可能需要优化才能达到预期的结果。
注意：所有试剂都应是新鲜制备的，并具有分析级，以确保最佳性能。下面描述的程序、方法、缓冲溶液和配体仅供参考，并非旨在限制。MagStart-Amine与一系列不同的配体固定缓冲液兼容。偶联量取决于配体，应优化条件以确保获得预期结果。
2.2. MagStart-Carboxyl的平衡
MagStart-Carboxy以 20 mg/ml悬液形式保存于20% 乙醇中。使用前需去除运输溶液，并在结合液中平衡微球。推荐的方案可按比例放大或缩小以满足要求。当前方案约结合 ~1 mg 蛋白质。
1）涡旋混合3秒彻底重悬羧基磁珠以确保均匀。
2）将 50 μl （1 mg） MagStart-Carboxyl羧基磁珠转移到新离心管中。
3）磁分离，磁颗粒附着在离心管壁。
4）用移液枪吸弃上清。
5）在200μl用于配体偶联的缓冲液（例如活化缓冲液，0.1M MES第2.3节）中洗涤/平衡微球，等待1分钟进行平衡。
6）将离心管放在磁力架上，将管子与磁力架一起倒置两次，以收集盖子中残留的任何磁微粒。
7）用移液管抽吸除结合缓冲液，重复步骤5和6两次，共洗涤三次。
8）从步骤6中取出缓冲液后，MagStart-Carboxyl羧基磁珠即可进行活化以进行配体结合。
2.3. 用EDC和NHS活化MagStart-Carboxyl
1-乙基-3-[3-二甲氨基丙基]碳二亚胺盐酸盐（EDC） 是一种水溶性偶联剂，可用于活化微粒上存在的羧基，N-羟基琥珀酰亚胺活化（NHS）可以协助该活化过程，以提供能够与蛋白质等上存在的伯胺反应的中间酯：
1）根据您的固定要求准备足够的活化液。活化溶液含有：20 mM EDC 和 50 mM NHS 在合适的缓冲液中，例如 0.1 M MES、0.5 M NaCl、pH 6.0。示例：将 28.8 mg NHS 和 19.1 mg EDC 溶解在 5 ml 缓冲液中。使用前确保 EDC 和 NHS 完全溶解。
2）将0.5ml活化液加入到按2.2制备的1mg平衡好的磁性微球中。
3）在室温下振荡磁性微球悬浮液15分钟。
4）磁分离，移液枪吸出上清液并丢弃。
5）用1ml固定化缓冲液洗涤微球三次，例如PBS，pH 7.0。在每次洗涤程序之间留出 10 秒的平衡时间。
2.4蛋白质偶联程序
注意：如果用于固定的蛋白质含量较低，则可能会发生颗粒聚集。如果您没有足够的蛋白质与磁珠偶联，则可以将载体蛋白（如 BSA 或酪蛋白）与目标蛋白混合，以提供足够的含量以避免聚集。
1）在合适的偶联缓冲液（不含伯胺，例如PBS，pH 7.0）中配制要偶联的蛋白质，并添加到磁性微球悬浮液中。
2）使用倒置混匀器在室温下反应2-24小时，或温度敏感的配体在4°C下反应。
3）将离心管放在磁力架上。
4）通过移液器吸取上清，丢弃或保留以备后续测定偶联效率。
5）仅用200μl偶联缓冲液洗涤两次（洗涤之间平衡1分钟）。磁分离，吸弃上清。
6）加入500μl过量含胺封闭剂的合适缓冲液（例如，200mM乙醇胺或天冬氨酸，PBS，pH 7.0），并在室温下孵育3小时（或在4⁰C下孵育12+小时）以淬灭微球上任何剩余的胺反应性残留物。
7）磁分离吸弃多余的淬火剂。
8）可选：用含有 0.5–1 M NaCl 的 500 μl 合适缓冲溶液洗涤 3 次，以去除可能的非共价结合蛋白质和非反应物。磁分离回收微球并吸出洗涤液。
9）在合适体积的缓冲液中洗涤/平衡含有固定化配体的微粒，以备进一步应用或储存。微粒现在已准备好用于您的下游实验。
10）固定化生物制品可与合适的防腐剂（例如含有0.05%叠氮化钠的磷酸钠缓冲液）一起储存4°C。不要冷冻微球。
3. 常见问题
问题
可能原因
改善方法
配体不与微粒结合
活化液不稳定
使用新制备活化液
不正确的结合pH
确保活化pH 5-6.5之间
校准pH计
蛋白质降解
添加蛋白酶抑制剂或新配蛋白溶液
样品或溶液中的干扰物阻止结合
确保缓冲液不含伯胺，例如不使用Tris或甘氨酸缓冲液。如含则需脱盐
微粒数量不足
增加颗粒的数量
蛋白质/配体含量过低
使用浓度更高的配体溶液，将总蛋白浓度增加到2~10 mg/ml
