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实验常用试剂、缓冲液的标准配制方法

来源:生物磁珠专家 2019-6-11 22:34:27      点击:

11M Tris-HCl            □组份浓度1 MTris-HCl
(pH7.4,7.6,8.0)   □配制量1L
    □配置方法 1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。
                         2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
                         3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
                                                        pH值                      浓HCl 
                                                        7.4                         约70mL
                                                        7.6                         约60mL
                                                        8.0                         约42mL
                        4. 将溶解定容至1L。 
                       5. 高温高压灭菌后,室温保存。                           

注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。 


21.5 MTris-HCl    □组份浓度1.5 MTris-HCl
    (pH8.8)            □配制量1L
        □配置方法 1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。
                           2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
                           3. 用浓盐酸调pH值至8.8。
                            4. 将溶液定容至1L。
                          5. 高温高压灭菌后,室温保存。 
       注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。 


310×TE Buffer        □组份浓度100 mMTris-HCl,10 mMEDTA
(pH 7.4,7.6,8.0)  □配制量1L
 □配置方法 1. 量取下列溶液,置于1L烧杯中。
                              1 MTris-HCl Buffer(pH7.4,7.6,8.0) 100mL
                            500 mMEDTA(pH8.0) 20mL
                      2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水,均匀混合。
                     3. 将溶液定至1L后,高温高压灭菌。
                     4. 室温保存。 


4
3 M 醋酸钠     □组份浓度3 M醋酸钠
    (pH5.2)          □配制量 100mL
    □配置方法 1. 称取40.8gNaOAc•3H2O置于100~200mL烧杯中,加入约40mL的去离子水搅拌溶解。
                          2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。
                        3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。
                         4. 高温高压灭菌后,室温保存。 


5
PBS Buffer          □组份浓度137 mMNaCl,2.7mMKCl,10 mMNa2HPO4,2 mMKH2PO4
                                □配制量1L

□配置方法 1. 称量下列试剂,置于1L烧杯中。
                                                      NaCl                     8 g
                                                      KCl                     0.2g
                                                      Na2HPO4          1.42 g
                                                      KH2PO4             0.27g
       2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水,充分搅拌溶解。
      3. 滴加HCl将pH值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1L。 
       4. 高温高压灭菌后,室温保存。
       注意:上述PBS Buffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1mMCaCl2和0.5 mMMgCl2。 


6
10 M醋酸铵         □组份浓度10 M醋酸铵
                                □配制量 100mL
   □配置方法 1. 称量77.1g醋酸铵置于100~200 mL烧杯中,加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。
                        2.加去离子水将溶液定容至100mL。
                          3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。
                         4.密封瓶口于室温保存。 
       注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。 


7
Tris- HCl平衡苯酚    □配置方法

       1. 使用原料:大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此,苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。  
       2. 操作注意:苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行,与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。 
       3. 苯酚平衡:因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相,因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上,苯酚平衡操作方法如下: 
          ① 液化苯酚应贮存于-20℃,此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。 
          ② 加入羟基喹啉(8-Quinolinol)至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。 
          ③ 加入等体积的1MTris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。  
          ④ 重复操作步骤③。 
          ⑤ 加入等体积的0.1MTris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。  
          ⑥ 重复操作步骤⑤,稍微残留部分上层水相。 
          ⑦ 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。 
          ⑧ 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

8、苯酚/氯仿/异戊醇  □配置方法

        1. 说明:从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白(25 :24 :1) 质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。 
        2. 配置方法:将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:1)均匀混合后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。 

910%(W/VSDS   □组份浓度 10%(W/V)SDS
                                   □配制量 100mL
    □配置方法 1.称量10g高纯度的SDS置于100~200mL烧杯中,加入约80mL的去离子水,68℃加热溶解。
                        2. 滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。
                           3. 将溶液定容至100mL后,室温保存。 


10
2 N NaOH           □组份浓度 2N NaOH
                                 □配制量 100mL 
    □配置方法

1.量取80mL去离子水置于100~200mL塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂)。 
      2. 称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。
     3. 待NaOH完全溶解后,用去离子水将溶液体积定容至100mL。
     4. 将溶液转移至塑料容器中后,室温保存。 


11
2.5 N HCl         □组份浓度 2.5 N HCl
                                  □配制量 100mL
    □配置方法 1. 在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸(11.6N),均匀混合。
                        2. 室温保存。 


12
5 M NaCl         □组份浓度5 MNaCl
                                 □配制量1L
  □配置方法 1. 称取292.2gNaCl置于1L烧杯中,加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。
                    2. 加去离子水将溶液定容至1L后,适量分成小份。
                    3. 高温高压灭菌后,4℃保存。 


13
20%(W/VGlucose     □组份浓度 20%(W/V)Glucose 
                                             □配制量 100mL 
 □配置方法 1. 称取20gGlucose置于100~200mL烧杯中,加入约80mL的去离子水后,搅拌溶解。
                    2. 加去离子水将溶液定容至100mL。
                     3. 高温高压灭菌后,4℃保存。 


14
Solution I            □组份浓度25 mMTris-HCl(pH8.0),10mMEDTA,50mMGlucose
(质粒提取用)        □配制量1L
    □配置方法 1. 量取下列溶液,置于1L烧杯中。
            1MTris-HCl(pH8.0)             25mL
                           0.5 MEDTA(pH8.0)            20mL 
                           20%Glucose(1.11M)           45mL
                              dH2O                                    910mL
                          2. 高温高压灭菌后,4℃保存。
                          3. 使用前每50 mL的Soliution I中加入2mL的RNase A(20mg/mL)。 


15
Solution II           □组份浓度250mMNaOH,1%(W/V)SDS
(质粒提取用)            □配制量 500mL
   □配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。
                                                        10%SDS                        50mL
                                                         2N NaOH                       50mL 
                      2. 加灭菌水定容至500mL,充分混匀。
                      3. 室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。 
                        注意:SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌。

16Solution III          □组份浓度3MKOAc,5MCH3COOH
(质粒提取用)           □配制量 500mL
 □配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。
                                                        KOAc                           147g
                                                        CH3COOH                    57.5mL 
                      2. 加入300mL去离子水后搅拌溶解。
                      3. 加去离子水将溶液定容至500mL。 
                       4. 高温高压灭菌后,4℃保存。 


17
0.5M EDTA            □组份浓度0.5 MEDTA
       (pH8.0)                  □配制量1L
     □配置方法 1. 称取186.1gNa2EDTA•2H2O,置于1L烧杯中。
                          2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌。
                          3. 用NaOH调节pH值值8.0(约20gNaOH)。 
                                  注意:pH值至8.0时,EDTA才能完全溶解。
                          4. 加去离子水将溶液定容至1L。
                          5. 适量分成小份后,高温高压灭菌。
                           6. 室温保存。 


18
1 M DTT          □组份浓度1 MDTT
                                  □配制量 20mL
          □配置方法 1. 称取3.09gDTT,加入到50mL塑料离心管内。
                             2. 加20mL的0.01 M的NaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。
                             3. 适量分成小份后,-20℃保存。 


19
10mM ATP            □组份浓度10mMATP
                                    □配制量 20mL
□配置方法 1. 称取121mg Na2ATP•3H2O,加入到50mL塑料离心管内。
                    2. 加20mL的25mMTris-HCl(pH8.0),搅拌溶解。
                   3. 适量分成小份,-20℃保存。


分子生物学实验常用培养基的配制方法

1Ampicillin             □组份浓度 100mg/ml Ampicillin
(100mg/ml)              □配制量 50mL
 □配置方法 1. 称量5gAmpicillin置于50mL离心管中。
                       2. 加入40mL灭菌水,充分混合溶解后,定容至50mL。
                       3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。
                       4. 小份分装(1mL/份)后,-20℃保存。 


2
IPTG                    □组份浓度 24mg/mL IPTG
(24mg/mL)             □配制量 50mL
     配置方法 1. 称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。
                      2. 加入40mL灭菌水,充分混合溶解后,定容至50mL。
                     3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。 
                     4. 小份分装(1mL/份)后,-20℃保存。 


3
X- Gal                  □组份浓度 20mg/mL X- Gal
(20mg/mL)             □配制量 50mL
          □配置方法 1. 称取1gX-Gal置于50mL离心管中。
                             2. 加入40mL DMF(二甲基甲酰胺),充分混合溶解后,定容至50mL。
                           3. 小份分装(1mL/份)后,-20℃保存。 


4LB培养基              □组份浓度 1%(W/V)Tryptone,0.5%(W/V)Yeast Extract,1%(W/V)NaCl
                                  □配制量1L
       □配置方法 1. 称量下列试剂,置于1L烧杯中
                                                        Tryptone                          10g
                                                         Yeast Extract                   5g 
                                                         NaCl                              10g
                            2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
                           3. 滴加5N NaOH(约0.2mL),调节pH值至7.0。
                            4. 高温高压灭菌后,4℃保存。 


5
LB/Amp培养基     □组份浓度  1%(W/V)        Tryptone
                                                     0.5%(W/V)     Yeast Extract
                                                     1%(W/V)        NaCl
                                                     0.1mg/mL            Ampicillin
                                 □配制量1L
        □配置方法 1. 称量下列试剂,置于1L烧杯中
                                                       Tryptone                     10g
                                                       Yeast Extract                5g
                                                       NaCl                           10g
                              2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
                          3. 滴加5N NaOH(约0.2mL),调节pH值至7.0。
                            4. 加去离子水将培养基定容至1L。 
                          5. 高温高压灭菌后,冷却至室温。
                           6. 加入1mL Ampicillin(100mg/mL)后均匀混合。
                                                    7.4保存。 


6TB培养基             □组份浓度     1.2%(W/V)       Tryptone
                                                       2.4%(W/V)      Yeast Extract
                                                       0.4%(V/V)        Glycerol 
                                                       17mM                   KH2PO4
                                                      72mM                   K2HPO4 
                                  □配制量1L
      □配置方法 1. 配制磷酸盐缓冲液(0.17MKH2PO4,0.72MK2HPO4)100mL。
                           2.称取下列试剂,置于1L烧杯中。
                                                       Tryptone                          12g 
                                                       Yeast Extract                    24g
                                                       Glycerol                              4mL 
                   3. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
                  4. 加去离子水将培养基定容至1L后,高温高压灭菌。
                  5. 待溶液冷却至60℃以下时,加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液。
                 6.4保存。 


7
TB/Apm培养基    □组份浓度 1.2%(W/V)    Tryptone 
                                                  2.4%(W/V)    Yeast Extract
                                                  0.4%(V/V)      Glycerol
                                                  17mM                 KH2PO4
                                                 72mM                 K2HPO4
                                                  0.1mg/mL           Ampicillin 
                                 □配制量1L
□配置方法

1. 配制磷酸盐缓冲液(0.17MKH2PO4,0.72MK2HPO4)100mL。溶解2.31gKH2PO4和2.54gK2HPO4于90mL的去离子水中,搅拌溶解后,加去离子水定容至100mL,高温高压灭菌。 
2. 称取下列试剂,置于1L烧杯中。
                                                      Tryptone                        12g
                                                      Yeast Extract                 24g 
                                                      Glycerol                           4mL
3. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
4. 加去离子水将培养基定容至1L后,高温高压灭菌。

 5. 待溶液冷却至60℃以下时,加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和1mL Ampicillin(100mg/mL)。
 6. 均匀混合后4℃保存。 


8
SOB培养基         □组份浓度 2%(W/V)       Tryptone
                                                  0.5%(W/V)    Yeast Extract
                                                  0.05%(W /V) NaCl
                                                 2.5mM               KCl
                                                10mM                 MgCl2 
                                □配制量1L
   □配置方法

1. 配制250mMKCl溶液。 在90mL的去离子水中溶解1.86gKCl后,定容至100mL。
2. 配制2MMgCl2溶液。在90mL的去离子水中溶解19gMgCl2后,定容至100mL,高温高压灭菌。

3. 称取下列试剂,置于1L烧杯中。 
                                                     Tryptone                       20g
                                                     Yeast Extract                 5g
                                                     NaCl                            0.5g
4. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。

5 量取10mL250 mMKCl溶液,加入到烧杯中。 
6. 滴加5N NaOH溶液(约0.2mL),调节pH值至7.0。
7. 加入去离子水将培养基定容至1L。
8. 高温高压灭菌后,4℃保存。
    9. 使用前加入5mL灭菌的2MMgCl2溶液。 


9
SOC培养基         □组份浓度    2%(W/V)          Tryptone
                                                    0.5%(W/V)             Yeast Extract
                                                    0.05%(W /V)          NaCl 
                                                    2.5mM                          KCl
                                                   10mM                           MgCl2
                                                   20mM                           葡萄糖
                               □配制量 100mL
 □配置方法

1. 配制1M葡萄糖溶液。将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中,充分溶解后定容至100mL,用0.22μm滤膜过滤除菌。
2. 向100mL SOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL,均匀混合。

3.4保存。 


10
2×YT培养基    □组份浓度 1.6%(W/V)Tryptone, 1%(W/V)Yeast Extract,0.5%(W/V)NaCl
                               □配制量1L
  □配置方法 1.称取下列试剂,置于1L烧杯中。
                                                    Tryptone                         16g
                                                    Yeast Extract                   10g 
                                                    NaCl                                 5g
                       2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
                       3. 滴加1N KOH,调节pH值至7.0。
                       4. .加水离子水将培养基定容至1L。
                       5. 高温高压后,4℃保存。 


11
Φb×broth培养基 □组份浓度 2%(W/V)Tryptone, 0.5%(W/V)Yeast Extract,0.5%(W/V)MgSO4•7H2O
                                    □配制量1L 
        □配置方法 1.称取下列试剂,置于1L烧杯中。
                                                         Tryptone                     20g
                                                         Yeast Extract               5g
                                                         MgSO4•7H2O                5g 
                       2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。            

3. 滴加1N KOH,调节pH值至7.5。
                        4. .加水离子水将培养基定容至1L。
                       5. 高温高压后,4℃保存。 


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NZCYM培养基  □组份浓度    0.5%(W/V)        Yeast Extract
                                                    0.1%(W/V)        Casamino Acid
                                                   1%(W /V)           NZ胺
                                                   0.5%(W /V)        NaCl 
                                                   0.2%(W /V)        MgSO4•7H2O
                               □配制量1L
           □配置方法 1.称取下列试剂,置于1L烧杯中。
                                                    Yeast Extract                 5g 
                                                    Casamino Acid               1g
                                                    NZ胺                           10g
                                                    NaCl                             5g
                                                    MgSO4•7H2O                 2g
                    2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
                  3. 滴加5N NaOH溶液(约0.2mL),调节pH值至7.0。
                  4. .加水离子水将培养基定容至1L。
                  5. 高温高压后,4℃保存。 


13
NZYM培养基      □组份浓度     0.5%(W/V)        Yeast Extract
                                                     1%(W /V)             NZ胺
                                                     0.5%(W /V)           NaCl
                                                     0.2%(W /V)           MgSO4•7H2O 
 □配置方法 NZYM培养基除不含Casamino Acid(酪蛋白氨基酸)外,其他成份与NZCYM培养基相同。 


14
NZM培养基       □组份浓度     1%(W /V)       NZ胺
                                                     0.5%(W /V)           NaCl
                                                     0.2%(W /V)           MgSO4•7H2O
□配置方法 NZM培养基除不含Yeast Extract(酵母提取物)外,其他成份与NZYM培养基相同。 


15
、一般固体培养基的  □配置方法 1. 按照液体培养基配方准备好液体培养基,在高温高压灭菌前,加入下列试剂中的一种。
       配制            Agar(琼脂:铺制平板用)             15g/L
                         Agar(琼脂:配制顶层琼脂用)        7g/L
                     Agarose(琼脂糖:铺制平板用)    15 g/L
                       Agarose(琼脂糖:配制顶层琼脂用)7g/L
                2. 高温高压灭菌后,带上手套取出培养基,摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀(此时培养基温度很高,小心烫伤)。  
               3. 待培养基冷却至50~60℃时,加入热不稳定物质(如抗生素),摇动容器充分混匀。
              4. .铺制平板(30~35mL培养基/90mm培养皿)。 


16
LB/Amp/X-Gal/IPTG  □组份浓度      1%(W /V)            Tryptone 
       平板培养基                      0.5%(W/V)          Yeast Extract
                                                1%(W/V)              NaCl
                                              0.1mg/mL                 Ampicillin
                                               0.5%(W /V)          IPTG
                                                0.04mg/mL                X-Gal
                                               1.5%(W /V)           Agar
                                       □配制量1L
  □配置方法 1. 称取下列试剂,置于1L烧杯中。
                                                             Tryptone                       10g 
                                                             Yeast Extract                  5g
                                                              NaCl                           10g
                      2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
                     3. 滴加5N NaOH溶液(约0.2mL),调节pH值至7.0。 
                     4. 加水离子水将培养基定容至1L后,加入15gAgar。
                    5. 高温高压灭菌后,冷却至60℃左右。
                    6. 加入1mL Ampicillin(100mg/mL)、1mL IPTG(24mg/mL)、2mL X-Gal(20mg/mL)后均匀混合。 
                   7. 铺制平板(30~35mL培养基/90mm培养基)。
                   8.4保存平板。 


17
TB/Amp/X-Gal/IPTG  □组份浓度   

 1.2%(W /V)             Tryptone
  平板培养基   2.4%(W/V)              Yeast Extract
                          0.4%(W/V)               Glycerol 
                         17mM                           KH2PO4
                       72mM                           K2HPO4
                        0.1mg/mL                     Ampicillin
                           0.024mg/mL                  IPTG 
                         0.04mg/mL                    X-Gal
                        1.5%(W /V)                Agar
   □配制量1L
  □配置方法 1.配制磷酸盐缓冲液(0.17MKH2PO4,0.72MK2HPO4)100mL。
                       2. 称取下列试剂,置于1L烧杯中。 
                                                              Tryptone                      12g 
                                                              Yeast Extract             24g
                                                          Glycerol                        4mL
                       3. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
                       4. 加水离子水将培养基定容至1L后,加入15gAgar。
                        5. 高温高压灭菌后,冷却至60℃左右。
                        6. 加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1mL Ampicillin(100mg/mL)、1mL IPTG(24mg/mL)、2mL X-Gal(20mg/mL)后均匀混合。 
                        7. 铺制平板(30~35mL培养基/90mm培养基)。 
                        8.4保存平板。


生物化学实验常用试剂的配制方法

10.5mol/L氢氧化钠溶液 □组份浓度 0.5mol/L
                                                 □配制量     2L
             □配置方法 1.准确称取氢氧化钠40g。
                                   2.用去离子水溶解并稀释至2L。 


20.5mol/L盐酸溶液          □组份浓度   0.5mol/L
                                                 □配制量      2L
             □配置方法 1.准确量取盐酸83.4mL。
                                 2.用去离子水稀释至2L。


40.2%葡萄糖标准溶液      □组份浓度 0.2%
                                                  □配制量1L 
   □配置方法 1.称取葡萄糖2.5g置于称量瓶中,在70℃干燥2小时。
                       2.干燥器中冷却至室温,重复干燥,冷却至恒重。
                        3.准确称取葡萄糖2.000g。
                        4.用去离子水溶解并定容至1L 
                        5.于4℃保存。


5250μg/mL牛血清             □组份浓度 250μg/mL
白蛋白标准液                          □配制量2L 
   □配置方法 1.准确称取250mg标准牛血清白蛋白。
                         2.用0.03mol/LpH7.8的磷酸缓冲液溶解并定容至1L。
                      3.4保存。


6Folin试剂甲                      

□配置方法 1.称取10g氢氧化钠溶于400mL去离子水中,
                                   加入50g无水碳酸钠,溶解,待用。
                 2.称取0.5g酒石酸钾钠,溶于80mL去离子水中,
                                   加入0.25g硫酸铜•5水,溶解。
                   3.将1:2:去离子水按20:4:1的比例混合即可。
                   4.4保存,可用一周。


7Folin试剂乙                      

□配置方法

1.在500mL的磨口回流装置内加入钨酸钠•2水25.0359g,
          钼酸钠•2水6.2526g,去离子水175mL,85%磷酸12.5mL,
          浓盐酸25mL,充分混合。
 2.回流10小时,再加硫酸锂37.5g,去离子水12.5mL及数滴溴。
 3.然后开口沸腾15min,以驱除过量的溴,冷却后定容到250mL。
 4.于棕色瓶中保存,可使用多年 
注意:上述制备地Folin试剂乙地贮备液浓度一般在2mol/L左 右,几种操作方案都是把Folin试剂乙稀释至1mol/L的 浓度作为应用液,我们这时是把贮备液于使用前稀释18 倍,使之浓度为0.1mol/L略高。这种稀释18倍后的Folin 试剂乙就是上文称之为的“应用液”。Folin试剂乙贮备  液浓度的标定,一般是以酚酞为指示剂。用Folin试剂乙去滴定1mol/L左右的标准氢氧化钠溶液,当溶液颜色由红变为紫灰,再突然变成墨绿即为终点,如果用氢氧化钠去滴定Folin试剂乙,终点不太好掌握,溶液地颜色是由浅黄变为浅绿,再变为灰紫色为终点。


 8DNS试剂                           

□配置方法 1.取3,5-二硝基水杨酸10g,加入2mol/L氢氧化钠溶液200mL。 (3,5-二硝基水杨酸试剂)                      

2.将3,5-二硝基水杨酸溶解,然后加入酒石酸钾钠300g。

3. 待其完全溶解,用去离子水稀释至2000mL,棕色瓶保存。


 95%蔗糖溶液                  □组份浓度 5%
                                               □配制量1L
              □配置方法 称取蔗糖50g,用去离子水溶解定容至1L。


 100.1mol/L蔗糖溶液      □组份浓度 0.1mol/L 
                                               □配制量1L
                                               □配置方法 称取蔗糖34.230g,用去离子水溶解并定容至1L。


1120%乙酸溶液             □组份浓度 20%
                                              □配制量1.2L
    □配置方法 量取冰乙酸300mL,用去离子水稀释至1200mL。


 1230%(W/VAcrylamide   

□组份浓度 30%(W/V)Acrylamide 0.05%
 □配制量1L
 □配置方法 1.称量下列试剂,置于1L烧杯中
                                                 Acrylamide  290g 
                                                  BIS                   10g
             2.向烧杯中加入约600mL的去离子水,充分搅拌溶解 
             3.加入去离子水将溶液定容至1L,用0.45μm滤膜滤去杂质。
             4.于棕色瓶中4℃保存。
      注意:丙稀铣胺具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收,
                其作用有积累性,配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无
                毒,但也应谨慎操作,因为有可能含有少量的未聚合成份。


 1340%(W/VAcrylamide    

 □组份浓度 40%(W/V)Acrylamide 0.05%
 □配制量1L
   □配置方法 1.称量下列试剂,置于1L烧杯中
                                                  Acrylamide    380g
                                                  BIS                    20g
                       2.向烧杯中加入约600mL的去离子水,充分搅拌溶解
                       3.加入去离子水将溶液定容至1L,用0.45μm滤膜滤去杂质。 
                       4.于棕色瓶中4℃保存。
注意:丙稀铣胺具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收, 其作用有积累性,配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无 毒,但也应谨慎操作,因为有可能含有少量的未聚合成份。


1410%(W/V)过硫酸铵       

  □组份浓度 10%(W/V)过硫酸铵 
 □配制量      10mL
  □配置方法 1.称取1g过硫酸铵。
                       2.加入10mL的去离子水后搅拌溶解。
                       3.贮存于4℃。
  注意:10%过硫酸胺溶液在4℃保存时间可使用2周左右,
              超过期限会失去催化作用。


15、考马斯亮蓝R-250染色液

□组份浓度 0.1%(W/V)考马斯亮蓝R-250,25%(V/V)异丙醇,
                                                                            10%(V/V)冰醋酸
                                                      □配制量      1L
      □配置方法 1.称取1g考马斯亮蓝R-250,置于1L烧杯中。
                           2.量取250mL的异丙醇加入上述烧杯中,搅拌溶解。
                           3.加入100mL的冰乙醋酸,均匀搅拌。
                          4.加入650mL的去离子水,均匀搅拌。
                           5.用滤纸出去颗粒物质后,室温保存。


16、考马斯亮蓝染色脱色液    

□组份浓度 10%(V/V)醋酸,5%(V/V)乙醇
   □配制量1L
   □配置方法 1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。
                                         醋酸     100mL
                                        乙醇        50mL 
                                           dH2O     850mL
              2.充分混合后使用。


17、凝胶固定液                       

 □组份浓度 50%(V/V)甲醇,10%(V/V)醋酸
(SDS-PAGE银氨染色用)           □配制量100L

 □配置方法 1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。
                                             甲醇   500mL
                                            醋酸 100mL 
                                            dH2O 400mL
                     2.均匀混合后室温保存。


18、凝胶处理液                        

□组份浓度 50%(V/V)甲醇,10%(V/V)戊二醛
(SDS-PAGE银氨染色用)          □配制量1L
 □配置方法 1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。
                                           甲醇       50mL
                                            戊二醛   10mL 
                                             dH2O     40mL
                      2. 均匀混合后室温保存。


19、凝胶染色液                       

□组份浓度 0.4%(W/V)硝酸银,1%(V/V)浓氨水,
      (SDS-PAGE银氨染色用) 0.04%(W/V)氢氧化钠
                                                     □配制量     100L
 □配置方法 1.量取下列试剂,加入100~200mL试剂瓶中。
                                      20%硝酸银 2mL
                                              浓氨水 1mL
                                    4%氢氧化钠 1mL
                                                  dH2O 96mL 
         2.均匀混合。该溶液应为无色透明状。如氨水浓度过低时溶液 
            会呈现混浊状,此时应补加浓氨水,直至透明。
        3.本染色液应现用现配,不宜保存。 


20
、显影液                                

□组份浓度 0.005%(V/V)柠檬酸,0.02%(V/V)甲醛
(SDS-PAGE银氨染色用)           □配制量1L
                   □配置方法 1.称取下列试剂,置于1L试剂瓶中。
                                                                                       柠檬酸 50mg
                                                                                           甲醛 0.2mL 
                                      2.加入1L去离子水后,摇动混合后溶解。
                                      3.室温保存。 


21
45%乙醇溶液                   □组份浓度 45% 
                                                    □配制量1L 
   □配置方法 量取无水乙醇450mL,加入去离子水550mL,混匀。


225%的十二烷基硫酸钠溶液 □组份浓度 5%
       (W/V)                                   □配制量0.1L

配置方法:称取5.0g十二烷基硫酸钠,溶于100mL4%的乙醇溶液中。


23、三氯甲烷-异戊醇混合试剂

配置方法 取500mL三氯甲烷试剂,加入21mL异戊醇试剂,混匀。 


24
1.6%乙醛溶液                     □组份浓度 1.6%
                                                       □配制量0.1L
       □配置方法 取47%乙醛3.4mL,用去离子水定容至100mL。


25、二苯胺试剂                          

□配置方法 1.称取二苯胺试剂0.8g,溶解于180mL冰乙酸中, 
                     2.再加入8mL高氯酸混匀。
                     3. 临用前加入0.8mL 1.6%乙醛溶液。 
                    注意:配制完成后试剂应为无色。


2615%三氯乙酸溶液              □组份浓度 15% 
                                                       □配制量        2L
  □配置方法 称取三氯乙酸300g,用去离子水溶解定容至2000mL。 


271%谷氨酸溶液                    □组份浓度 1%
                                                       □配制量      0.5L 
         □配置方法 1.称取5g谷氨酸,先用适量得用去离子水溶解。
                           2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。
                            3. 最后用去离子水定容至0.5L。


281%丙酮酸溶液                    □组份浓度     1%
                                                       □配制量     0.5L
           □配置方法 1.称取5g丙氨酸,先用适量得用去离子水溶解。 
                                2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。
                                3. 最后用去离子水定容至0.5L。


290.1%的碳酸氢钾溶液       □组份浓度 0.1% 
                                                     □配制量     0.5L
           □配置方法 称取碳酸氢钾0.5g,用去离子水溶解定容至0.5L。


300.05%的碘乙酸溶液       □组份浓度 0.05%
                                                    □配制量0.25L
       □配置方法 称取0.125g碘乙酸,用去离子水溶解定容至0.25L。


31Locke氏溶液                    □配制量2L
配置方法 称取18g氯化钠,0.84g氯化钾,48g氯化钙,0.3g碳酸
                  氢钠,2g葡萄糖,用去离子水溶解定容至2000mL。


320.2mol/L的丁酸溶液      □组份浓度 0.2mol/L
                                                   □配制量1L
         □配置方法 1.量取18mL正丁酸试剂。
                              2.用1mol/L的氢氧化钠中和。
                              3.再用去离子水定容至1L。


330.1mol/L的硫代硫酸钠溶液 □组份浓度 0.1mol/L
                                                           □配制量     10L 
     □配置方法 称248.17g硫代硫酸钠,用去离子水溶解并定至10L。


340.1mol/L的碘溶液          □组份浓度 0.1mol/L
                                                   □配制量1L
     □配置方法 1.称取碘12.7g和碘化钾25g。
                         2.用去离子水溶解并定容至1L。 
                                 3.用0.1mol/L的硫代硫酸钠标定。 


3510%氢氧化钠溶液           □组份浓度 10%
                                                    □配制量2L
        □配置方法 称取200g氢氧化钠,用去离子水溶解并定容至2L。


3610%盐酸溶液                  □组份浓度 10%
                                                   □配制量0.2L
        □配置方法 量取浓盐酸49.3mL,用去离子水定至0.2mL。


370.1%标准丙氨酸溶液      □组份浓度 0.1%
                                                    □配制量0.5L
      □配置方法 称取丙氨酸0.5g,用去离子水溶解并定容至0.5mL。


380.1%标准谷氨酸溶液      □组份浓度 0.1%
                                                    □配制量    0.5L 
      □配置方法 称取谷氨酸0.5g,用去离子水溶解并定容至500mL。


390.1%水合茚三酮乙醇溶液 □组份浓度 0.1%
                                                         □配制量         1L 
      □配置方法 称取1g水合茚三酮试剂,溶于1000mL无水乙醇中。


40、酚溶液                                   

□配置方法 在大烧杯中加入80mL去离子水,再加入300g苯酚,在水 浴中加热搅拌、混合至苯酚完全溶解。将该溶液倒入盛有200mL去离子水的1000mL分液漏斗内,轻轻振荡混合,使其成为乳状液。静止7~10小时,乳状液变成两层透明溶液,下层为被水饱和的酚溶液,放出下层,贮存于棕色瓶中备用。

 
41
0.5%淀粉溶液                      □组份浓度 0.5%
                                                         □配制量    0.1L
        □配置方法 称取淀粉0.5g,用去离子水溶解定容至0.1L。 


42
、对羟基联苯试剂                   

配置方法 称取对羟基联苯1.5g,溶于100mL0.5%氢氧化钠溶液中,
                配制成1.5%的溶液。若对羟基联苯颜色较深,应用丙酮

或 无水乙醇重结晶,放置时间较长后,会出项针状结晶,应摇匀后使用。


生物化学实验常用缓冲液的配制方法
10.2 mol/L 磷酸缓冲液      □组份浓度 0.2mol/L
    
pH 6.0                           □配制量1L 
            □配置方法 1. 称取磷酸氢二钠•12水8.82 g。
                                2. 称取磷酸二氢钠•2水27.34g。
                               3. 用去离子水溶解并定容至1L。室温保存。
                     注意:此为母液,使用时稀释40倍使用。


2、洗脱液                                 □组份浓度 0.15mol/L
     (含0.15mol/L                □配制量      10L
     化钠的0.005mol/L              □配置方法 1.称取氯化钠87.66g。
     pH 6.0的磷酸缓冲液)                         2. 用0.2mol/L pH6.0的

磷酸缓冲液250mL溶解。
                                              3. 用去离子水稀释至10 L。室温保存。  


30.3mol/L磷酸缓冲液        □组份浓度 0.3mol/L
      pH7.8                           □配制量      0.5L
                           □配置方法 1.准确称取磷酸氢二钠•12水49.150g。
                                                2.磷酸二氢钠•2水2.000g。
                                    3. 用去离子水溶解并定容至0.5L。室温保存。
                         注意:此为母液,使用时稀释10倍使用。


40.2mol/L乙酸缓冲液        □组份浓度 0.2mol/L
      pH4.6                           □配制量       2L 
                    □配置方法 1.准确称取乙酸钠•3水54.44g。
                                        2. 加入23mL冰乙酸,溶解。
                                         3. 用去离子水溶解并定容至2L。4℃保存。


50.2mol/L磷酸-柠檬酸      □组份浓度 0.2mol/L
       缓冲液                                □配制量     各1L
     pH 2.64.66.6       

□配置方法  1. 母液A(0.2mol/L的Na2HPO4溶液):称取Na2HPO4•12水143.256g, 用去离子水定容至2L。
                      2. 母液B(0.1mol/L的柠檬酸溶液):称取柠檬酸•1水42.028g 用去离子水溶解定容至2L。 
                       3. pH2.6、4.6、6.6的三种缓冲液如下表配制: 
                           pH值 A(mL) B(mL) 
                           2.6     109.0        891.0 
                           4.6      467.5       532.5 
                            6.6       727.5      272.5 
                       4. 按上表混匀后,4℃保存。


620×SSC 缓冲液                 □配制量      1L
      pH7.0                          □配置方法 1.准确称取175.2g氯化钠。
                                                  2.准确称取88.2g柠檬酸钠•2水。
                                                 3.溶解于800mL去离子水中。
                           4.加入数滴10mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0。
                                               5.加去离子水定容至1L。 
                      注意:按实验需要可分装后高压灭菌。
        10×SSC、5×SSC、1×SSC可由20×SSC做相应稀释得到。 


70.15mol/L氯化钠-                 □组份浓度    0.15mol/L
      乙二胺四乙酸二钠                □配制量      1L
      缓冲液                  □配置方法   1.准确称取氯化钠8.77g。
     pH8.0                                     2. 称取乙二胺四乙酸二钠37.2g。
                                                          3. 溶于800mL去离子水中。
                                                    4.用固体的氢氧化钠调pH值为8.0。 
                                                   5.加去离子水定容至1L。 


81/15mol/L的磷酸盐              □组份浓度 0.15mol/L
       缓冲液                                     □配制量     1L
      pH7.6                              

  □配置方法

1.溶液甲(1/15mol/L的KH2PO4溶液):称取KH2PO4 9.078g,用去离子水溶解定容至1L。 
 2. 溶液乙(1/15mol/L的Na2HPO4溶液):称取Na2HPO4• 2水11.876g(或磷酸氢二钠•12水23.894g)用去离子水溶解定容至1L。
 3.pH7.6磷酸盐缓冲液:将①和②按1.4:8.6比例混合即可。


95×Tris-GlycineBuffer         □组份浓度0.125MTris,1.25MGlycine,0.5%(w/v)SDS
SDS-PAGE电泳缓冲液)      □配制量       1L 
  □配置方法 1.称取下列试剂,置于1L烧杯中。
                                                                                   Tris          15.1g
                                                                                   Glycine       94g
                                                                                   SDS           5.0g
                       2.加入约800mL的去离子水,搅拌溶解。
                       3.加去离子水将溶液定容至1L后,室温保存。 


105×SDS-PAGE                  □组份浓度250mMTris-HCl(pH6.8)
        Loading Buffer                                    10%(W/V) SDS 
                                                                       0.5%(W/V) BPB 
                                                                       50%(V/V) 甘油 
                                                                       5%(W/V) β-巯基乙醇 
                                                        □配制量         5mL 
            □配置方法 1.量取下列试剂,置于10mL塑料离心管中。 
                                                                             1MTris-HCl 1.25mL
                                                                                SDS0.5g
                                                                                BPB 25mg
                                                                                甘油 2.5mL
                                     2.加入去离子水溶解后定容至5mL。
                                    3.小份(500μl/份)分装后,于室温保存。
                                     4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。
        5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右