免疫组化试剂配制之缓冲液

来源:生物磁珠专家 2019-6-11 22:21:20      点击:

做免疫组化实验时,为保证实验效果,组织都需要进行洗涤,其中离不开缓冲液。下面主要介绍一些缓冲液的配制。


  一、不同PH的MPBS液
  1、0.01M的PBS(PH7.2)液
  NaCl 8g
  Na2HPO4 1.15g
  KH2PO4 0.2g(NaH2PO4)
  加双蒸水至1000ml
  2、0.02M的TBS(PH8.2)液
  Tris 4.84g
  Nacl 17.5g
  BSA 2.0g
  NaN3 1.0g
  加双蒸水至1500ml
  在搅拌下加浓HCL至PH8.2,再加双蒸水至2000ml(BSA-牛血清白蛋白;NaN3-叠氮钠,为防腐剂)
  3、0.05M的TBS(PH7.4)液
  Tris(三羟甲基胺基甲烷) 12.1g
  Nacl 17.5g
  加双蒸水至1500ml
  在搅拌下加浓HCL至PH7.4,再加双蒸水至2000ml
  4、0.05M的TB液(PH7.6)液
  Tris 60.75g
  1N HCL约420ml
  加双蒸水至1000ml

  配制方法:先以少量双蒸水(300ml)溶解Tris,加入HCL后,再用1N HCL或1N NaOH将PH值调至7.6,再加双蒸水至1000ml。用时将0.5MTB稀释10倍,即为0.05MTB液(PH7.6)液


  二、枸橼酸盐缓冲液
  1、储存液
  A.0.1M枸橼酸溶液:称取21.01g枸橼酸(C6H8O7·H20)溶于1000ml蒸馏水中
  B.0.1M枸橼酸钠溶液:称取29.41g枸橼酸钠(C6H5Na3O7·2H20)溶于1000ml蒸馏水中
  2、工作液
  取9ml A液和41ml B液加入450ml蒸馏水中,溶液pH值应为6.0±0.1
  3、PH3.5枸橼酸盐缓冲液
  枸橼酸2.55g
  枸橼酸钠2.35g
  双蒸水加至100ml
  4、PH6.0枸橼酸盐缓冲液
  21.01g枸橼酸加入蒸馏水1000ml 0.1M枸橼酸
  29.41g枸橼酸钠加入蒸馏水1000ml 0.1M枸橼酸钠

  使用时取0.1M枸橼酸9ml和0.1M枸橼酸钠41ml,再加入蒸馏水450ml,即配成0.01M的枸橼酸缓冲液(PH6.0±0.1),用于微波修复抗原


  三、0.05M醋酸缓冲液(PH3.5)
  先配制0.1M的醋酸和醋酸钠溶液
  0.1M醋酸液:冰醋酸5.75ml,双蒸水加至1000ml
  0.1M醋酸钠液:醋酸钠13.61g,双蒸水1000ml
  再配制0.1M醋酸缓冲液
  0.1M醋酸210ml和0.1M醋酸钠790ml混合即可
  用时将0.1M的醋酸缓冲液稀释5倍,即为0.05M醋酸缓冲液(PH5.2)