时间分辨荧光免疫层析定量检测技术介绍

来源:生物磁珠专家 2020-9-15 17:41:01      点击:
一、稀土元素发光特点

1、Stokes位移大
    Stokes位移达200nm,很容易分辨激发光和发射光,从而排除激发光干扰。而普通荧光物质荧光光谱的Stokes位移只有几十纳米,激发光谱和发射光谱通常有部分重叠,互相干扰严重;



2、衰变时间长
    镧系元素与普通的荧光团比较,镧系元素离子螯合物荧光的衰变时间(decay time)长(10~2000us),为传统荧光的103~106倍。通过时间分辨,可极大地降低了本底荧光,实现了高信噪比;



3、激发光谱宽而发射光谱窄
    镧系螯合物激发光光谱较宽,最大激发波长在300~500nm,可通过增加激发光能量来提高灵敏度。而发射光谱带很窄,甚至不到10nm,可采用只允许发射荧光通过的滤光片,进一步降低本底荧光,狭窄的发射波段为多次分析成为可能。


二、荧光纳米微球

    与经典的时间分辨荧光免疫分析方法DELFIA法不同,时间分辨荧光免疫层析技术采用荧光纳米微球作为标记物,每个微球中可包裹成千上万个荧光分子,大大提高了标记效率,有效的提高了灵敏度;同时纳米荧光微球表面修饰有合适密度的羧基,用于与蛋白或抗体的共价偶联,提高标记物的稳定性。



三、时间分辨荧光免疫层析(TRFILF)原理
    当将含有待测抗原(抗体)的样品滴在加样区,待测样品中的抗原(抗体)与结合垫中的荧光纳米微球标记的抗体(抗原)结合并通过毛细作用向前层析,当达到检测区后,与检测线上固定的抗体(抗原)结合,形成微粒-抗体-抗原-抗体夹心复合物并被固定在检测线上,而多余的荧光微球标记物继续向前层析,与固定在质控线二抗结合。反应结束后,用紫外光源(340nm)对检测区扫描检测,检测线和质控线上荧光纳米微球发出高强度的荧光(615nm),且衰变时间也较长。利用延缓测量时间,待样品基质中自然发生的短寿命荧光(1-10ns)全部衰变后,再测量稀土元素的特异性荧光,这样就可以完全排除特异本底荧光的干扰。通过检测线和质控线荧光强度的强弱及其比值,即可分析出样品中待测物的浓度。


四、时间分辨荧光免疫层析优势
1)灵敏度高,比金标、普通荧光灵敏度高2-3个数量级;
2)可定量检测,根据内置的标准曲线,可给出待测物的具体浓度;
3)标记物稳定,抗干扰强,检测结果重复性好;
4)操作简便,检测时间短,可用于现场筛查;
5)成本便宜,性价比高;

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