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常见外泌体提取试剂盒特点

2025-4-24 20:18:53点击:



外泌体(exosomes)是一种能被机体内大多数细胞分泌的直径大约为 30 ~ 150 nm 的具有脂质双层膜的微小膜泡。它广泛存在并分布于各种体液中,携带和传递重要的信号分子,形成了一种全新的细胞间信息传递系统,影响细胞的生理状态并与多种疾病的发生与进程密切相关。

外泌体提取试剂盒提供了一种简单可靠的方法可从细胞培养上清液,血清,血浆,乳液,尿液,唾液、酵母、植物中提取完整的外泌体。本产品提取的外泌体囊泡适用于下游的电镜分析、NTA分析、纳米流式(NanoFCM)分析、Western Blot、荧光定量(qPCR)和高通量测序等应用。


方法对比

研究外泌体内涵成分的前提是对其进行高质量的提取,由于外泌体粒径较小且与多种其他生物分子混合在一起,导致其分离纯化困难,阻碍了对其的进一步研究。

近年来,研究人员根据外泌体理化性质研发了多种分离纯化方法:常用的有超速离心法、密度梯度超速离心法、超滤法、多聚物沉淀法(PEG)、免疫磁珠法、试剂盒分离法等。

而对于外泌体的分离,首先要关注外泌体的提取质量,包括纯度、囊泡状态、得率及重复性等方面的评估,然后才是技术路线的选择。

纯化方法 外囊泡纯度 囊泡状态 可操作性 回收量 重复性 设备要求
超速离心法 ★★ ★★ ★★★ ★★ 超速离心机
密度梯度离心法 ★★★★ ★★ 超速离心机
超滤法 ★★ ★★★ ★★★ ★★ ★★ 普通离心机
多聚物沉淀法 ★★ ★★★★ ★★★★ ★★ 普通离心机
抗体亲和磁珠纯化
★★★ ★★ ★★★ ★★ ★★★★ 普通离心机+磁力架
通用磁珠 ★★★ ★★★ ★★★ ★★★ ★★★ 普通离心机+磁力架


1. 超速离心法是最常用的外泌体纯化手段,目前已发表文献引用最多的方法,采用低速离心、高速离心交替进行,可分离到大小相近的囊泡颗粒。

优点:无需特殊试剂,操作简便,适合大批量样本。

缺点:耗时耗力,纯度相对较低,回收率不稳定,重复离心会一定程度损伤外泌体,设备要求高。


2. 密度梯度超速离心法是在超速离心力作用下,使蔗糖溶液形成从低到高连续分布的密度阶层,是一种区带分离法。通过密度梯度离心,样品中的外泌体将在1.13-1.19g/mL的密度范围富集。

优点:纯度相对较高,适合大批量样本。

缺点:步骤繁琐,耗时,回收率不稳定,重复离心会一定程度损伤外泌体,设备要求高。


3. 超滤法是将溶剂及小分子物质过滤到膜的另一侧,而将相对大分子物质截留在超滤膜上,以达到分离的目的。

优点:简单高效,不影响外泌体的完整性。

缺点:外泌体可能会阻塞过滤孔,导致膜的寿命减短,分离效率和纯度较低。此外,截留在膜上的外泌体间也会发生粘附,导致产量降低。


4. 多聚物沉淀法根据化合物与外泌体的理化特性,利用共沉淀或者反向筛选的方式对外泌体进行分离纯化。

优点:操作简单、耗时短、无设备限制。

缺点:纯度较低,存在假阳性(杂蛋白较多或一些难以去除的聚合物),机械力或化学添加物对外泌体产生破坏,存在于分离物中的聚合物也可能会干扰下游分析等。


5. 抗体亲和(磁珠)法利用包被单克隆抗体的磁珠结合外泌体,外泌体表面有其特异性标记物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合,即可将外泌体吸附并分离出来。

优点:纯度较高,特异性和重复性好、操作简便、无设备限制。

缺点:效率和回收率较低,仅能捕获表达特定抗原的目标外泌体,外泌体生物活性易受pH和盐浓度影响,囊泡完整性影响较大。

综上所述,现有技术的方法提取到的外泌体,缺陷在于:收率较低,耗时长、纯度不高,外泌体囊泡不完整等。


6. 通用磁珠法利用磁珠表面基团带电特性结合外泌体膜结构中的磷脂,磁珠与外泌体囊泡孵育后结合,即可将外泌体吸附并分离出来。

优点:效率和回收率较好、操作简便、耗时短、无设备限制。

缺点:纯度一般,存在假阳性,体液环境对外泌体与磁珠的结合影响较大,囊泡完整性影响较大。

综上所述,现有技术的方法提取到的外泌体,缺陷在于:收率较低、耗时长、纯度不高、外泌体囊泡不完整等。