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DNA电泳常见问题汇总

2017-8-28 17:10:55点击:

问题

原因

解决办法


DNA带模糊

DNA降解

避免核酸酶污染

电泳缓冲液陈旧

 

电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,pH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液

所用电泳条件不适

电泳时电压不应超过20V/cm,温度< 30℃;巨大DNA链电泳,

温度应< 15℃;核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力

DNA上样量过多

减少凝胶中DNA上样量

DNA样含盐过高

电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐

有蛋白污染

电泳前酚抽提去除蛋白

DNA变性

电泳前勿加热,用 20mM NaCl缓冲液稀释DNA

不规则DNA带迁移

对于λ/Hind III片段cos位点复性

电泳前于 65℃加热DNA 5分钟,然后在冰上冷却5分钟

电泳条件不合适

电泳电压不超过20V/cm;温度< 30℃;经常更换电泳缓冲液

DNA变性

以 20mM NaCl Buffer稀释DNA,电泳前勿加热

带弱或无DNA带

DNA的上样量不够

增加DNA的上样量;聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳

灵敏度稍高,上样量可适当降低

DNA降解

避免DNA的核酸酶污染

DNA走出凝胶

缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度

对于EB染色的DNA,   

所用光源不合适

应用短波长(254nm)的紫外光源

DNA带缺失

小DNA带走出凝胶

缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度

分子大小相近的DNA带不易分辨

增加电泳时间,核准正确的凝胶浓度

DNA 变性

电泳前请勿高温加热DNA链,以 20mM NaCl Buffer稀释DNA

DNA链巨大

常规凝胶电泳不合适   在脉冲凝胶电泳上分析