联系方式 Contact

地址:厦门市集美区集美大道1300号

电话:15805933710

联系人:许先生

QQ:1974707632

微信:15805933710

邮件:purimag@139.com

在线QQ交谈 在线QQ交谈

搜索 Search

链霉亲和素(Streptavidin,SA)问答

2016-7-13 9:09:50点击:

1.什么是链霉亲和素(Streptavidin,SA)?

答:链霉亲和素(streptavidin)是由阿维丁链霉菌(Streptomyces avidinii)分泌的一种小分子非糖基化蛋白质,与亲和素(avidin)有相似生物学特性。其天然形式为同源四聚体,分子量约60kDa。 SA及其衍生物与生物素的亲和力更强,特异性结合更高。已被广泛用于生物技术领域。


2.Streptavidin有何用途?

答:Streptavidin已被广泛应用于酶联免疫吸附实验(ELISA)、组织工程、免疫组织化学、时间分辨免疫荧光技术(TRFIA)、DNA探针、QPCR、亲和色谱填料和SA磁珠、单克隆抗体纯化、生物传感器、等离子检测、生物纳米材料、靶向制药、生物芯片等生物技术领域。


3.为什么要用SA技术更新老旧的二抗ELISA?

答:一、与传统ELISA相比,链霉亲和素的ELISA的灵敏度提高了5-20倍,且特异性高。

二、与传统ELISA相比,使用SA技术能够大大减少抗体用量(节省60%以上),节省试验成本。


4.SA是怎样提高诊断检测灵敏度的?

答: 天然链霉亲和素分子可以高度特异性地与四分子生物素结合,两者之间的亲和力极为强烈。在用于标记检测时,先将抗体进行生物素化,标记后的SA与生物素化一抗或者二抗结合,将反应信号进行了两步或者三步放大,大大提高检测的灵敏度。


5.SA的活性单位代表什么?

答:1mg链霉亲和素蛋白结合生物素的微克数就是链霉亲和素的活性单位,它代表了SA结合生物素的能力。


6.SA的亲和力含义是什么?

答:SA的亲和力就是SA与生物素或者生物素衍生物特异性结合的能力。


7.SA的活性单位高能代表亲和力就好吗?

答:不能。天然核心SA国际比活为12-15 U,SA118比SA核心结构少9个氨基酸,因为其分子小,比活高达16-18 U,但其偶联效率、亲和力、半衰期均不及SA159、SA127等核心结构。


8.结合稳定性SA的优势是什么?

答:结合稳定性SA具有成熟SA的127aa最佳核心结构,SA与生物素结合半寿期≥12小时,高偶联效率,信号持久稳定。


9.SA的亲和兼容型含义是什么?

答:野生型SA与生物素结合后其解离常数为10-15,很难将SA与生物素分开。SA亲和兼容型是将SA分子进行结构修饰,使得含Strept-Tag的蛋白或者生物素化物质,在温和条件下从SA上洗脱下来,从而达到分离纯化的目的。


10.SA与Avidin的区别?

答:①链霉亲和素等电点(pI=6.0)比亲和素(pI=10.5)低,再加上不带任何糖基,链霉亲和素在应用中非特异性结合远比亲和素低;

②链霉亲和素更适合结合长臂生物素;

③链霉亲和素对热的耐受性比亲和素强;

④亲和素活性在13-15U,链霉亲和素活性在14-18U。


11.SA如何用作表面被料?

答:将SA包被于固相载体(聚苯乙烯等)表面,依靠蛋白质与固相载体表面的疏水作用通过物理吸附结合。


12.SA磁珠有何用途?

答:SA磁珠是将链霉亲和素偶联到磁性固相基质上,主要用于分离纯化带有Strept-Tag的蛋白或生物素化物质。较之SA层析介质,纯化操作更加的方便、快捷。


13.为什么有些SA-HRP产品信号不稳定?

答:①不同厂家标记的SA-HRP分子,一分子SA上标记的HRP数量不同

②HRP分子较大,可能会影响SA与生物素的结合

③不同厂家用于标记的HRP活性参差不齐


14.SA-荧光蛋白有何用途?

答:SA交联上荧光素(TSF系列)或者将SA与荧光蛋白融合表达(SA融合蛋白系列),在特定波长下,激发出不同颜色的荧光。利用SA与生物素或者生物素衍生物特异性结合的特性,可以用于生物素标记的抗原、抗体、核酸、蛋白或其它生物素标记分子的检测与定位,并且明显提高方法的灵敏度与特异性。如,流式细胞记数和检测、临床影像学成像等应用。


15.SA-荧光素酶有何用途?

答:SA-荧光素酶在加入底物(荧光素)时,会发出荧光。荧光素酶标体系发光是通过化学反应自发光,不需要外界光的激发,这样激发背景值就几乎没有,可得到比较好的信噪比。

在医学研究领域与基因工程中可作为重要工具,广泛用于ELISA(抗原、抗体)、Western Blot实验、病灶部位的定位与分析、单个细胞、转基因生物、动物和人体基因表达的实时、低光成像。


16.什么叫单体SA?

答:单体型链霉亲和素(mSA)是由野生四聚体链霉亲和素(Tetramer SA, tSA)分子改造而来。具有SA的127aa最佳核心肽段序列,每分子单体型SA(mSA)结合1个生物素分子,亲和力2.2 X 10-12/Mole。


17.单体SA与四聚体SA的区别?

答:四聚体SA是由4条相同的肽链组成,一分子链霉亲和素可以高度特异性地与四分子生物素结合。单体SA是由1条肽链组成,一分子链霉亲和素可以高度特异性地与一分子生物素结合。


18.单体SA有何特殊用途和利益?

答:单体SA较之天然的四聚体SA分子量更小,因此更容易透过细胞膜与靶位点结合,提高了检测的灵敏度。


19.什么是“链霉亲和素标签”(Strept-Tag)?

答:“链霉亲和素标签”(Strept-Tag)是一段由8个氨基酸(Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys)构成的短序列,可以与SA的生物素结合位点,特异性的与SA结合。


20.Strept-Tag的优点和用途是什么?

答:将Strept-Tag与重组蛋白质融合后,可以采用SA层析介质(TSS系列、MSS系列)对重组蛋白进行检测或者分离纯化。Strept-Tag与SA的配合使用,大大提高了检测的灵敏度,蛋白的纯度。


选购PuriMag链霉亲和素磁珠请参考产品页: http://www.purimagbead.com/Product/8271042221.html