你的位置:首页 > 技术支持 > DNA/RNA提取

DNA提取经典方法之——动物组织DNA提取

来源:生物磁珠专家 2017-5-3 18:47:40      点击:

一、材料

哺乳动物新鲜组织。


二、设备

移液管、高速冷冻离心机、台式离心机、水浴锅。


三、试剂

1、分离缓冲液:10mmol/L Tris•Cl pH7.4,10mmol/L NaCl,25mmol/L EDTA。

2、其它试剂:10% SDS,蛋白 K (20mg/ml或粉剂),乙醚,酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),无水乙醇及70%乙醇,5mol/L NaCl,3mol/L NaAc,TE。


四、操作步骤

1.切取组织5g左右,剔除结缔组织,吸水纸吸干血液,剪碎放入研钵(越细越好)。

2.倒入液氮,磨成粉末,加10ml分离缓冲液。

3.加1ml 10% SDS,混匀,此时样品变得很粘稠。

4.加50μl或1mg 蛋白 K,37℃保温1-2小时,直到组织完全解体。

5.加1ml 5mol/L NaCl,混匀,5000rpm离心数秒钟。

6.取上清液于新离心管,用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提。待分层后,3000rpm离心 5分钟。

7.取上层水相至干净离心管,加2倍体积乙醚抽提(在通风情况下操作)。

8.移去上层乙醚,保留下层水相。

9.加1/10 体积3mol/L NaAc,及2倍体积无水乙醇颠倒混合沉淀DNA。室温下静止10-20分钟,DNA沉淀形成白色絮状物。

10.用玻棒钩出DNA沉淀,70%乙醇中漂洗后,在吸水纸上吸干,溶解于1ml TE中,-20℃保存。

11.如果DNA溶液中有不溶解颗粒,可在5000rpm短暂离心,取上清; 如要除去其中的RNA,可加5μl RNaseA(10μg/μl),37℃保温30分钟,用酚抽提后,按步骤9-10重沉淀DNA。


五、Purimag磁珠用于提取DNA

使用Purimag的核酸提取磁珠,可以高效提取植物组织DNA。通常在经典方法沉淀DNA步骤之前加入磁珠,即可让DNA吸附在PuriMag磁珠表面,洗脱后即可得到高纯度的DNA。