1. 概述
PuriMagTM G-NHS功能化磁性纳米粒子是均一的、聚合物包覆的超顺磁纳米粒，亲水表面确保磁珠在各种缓冲液中具有出色的分散性、低非特异吸附和易操作性，表面涂有高密度NHS（N-羟基琥珀酰亚胺）官能团可永久共价偶联含伯胺的配体。表面涂有高密度NHS（N-羟基琥珀酰亚胺）官能团。配体中的其他活性基团无需在偶联之前进行保护。耦合很快（室温pH 6.5~9下15~30分钟，4℃下4小时）。 PuriMagTM G-NHS磁珠最适合与大蛋白或小肽结合。
NHS磁珠偶联机理：
2. 产品信息
Product Specifications
Description
Polymer coated Fe3O4 nanoparticles
Particle Size
200 nm
Number of Beads
~1.7×1010 beads/mg
Matrix
Proprietary polymer
Functional group
NHS group
Group density
~300 µmole / g of Beads
Magnetization
60~70 EMU/g
Formulation
10 mg/ml suspension in Acetone
Stability
pH 3.5~10, 4~80 ℃, most organic solvents
Storage
1 year at 2~8 ℃. Do not freeze.
3. 使用方法
注意：1）以下方案是将含胺的配体与PuriMagTM G-NHS活化的磁珠偶联的示例。强烈建议进行滴定，以优化用于每种单独应用的磁珠量。该方案可以相应地按比例放大和缩小。
2）偶联缓冲液的离子强度对于获得更高的耦合效率至关重要。
3）偶联缓冲液应具有最小的离子强度，并且不应包含任何氨基（例如Tris），但洗涤或储存缓冲液可以包含氨基或羧基。
A. 所需材料
1）磁力架（用于手动操作）：用于容纳12个单独的1.5~2ml离心管；用于容纳2个50 ml离心管或2个15 ml离心管
2）偶联缓冲液：10 mM磷酸钾、0.15 M NaCl、pH 5.5（注意：pH 6.5~9可用于偶联，但是在pH〜5.5时可获得最高偶联效率）；
3）洗涤缓冲液：0.05 M Tris-HCl、0.5 M NaCl、pH 8.0；
4）封闭缓冲液：1 M乙醇胺、pH 9；
B. 蛋白质偶联
1）称重并将30 mg磁珠转移到离心管中。
2）将0.5-1 mg蛋白质/肽溶解在1ml偶联缓冲液中。
注意：NHS激活的磁珠的耦合效率因配体而异。使用者应根据经验优化配体的浓度。建议蛋白质结合使用0.5~10 mg / ml。对于小肽，配体的浓度应为每毫升至少200μmol配体。
3）将蛋白质溶液添加到磁珠中。重悬磁珠，并通过移液或涡旋混合非常均匀。在室温下连续旋转孵育反应4~6小时或过夜。
4）将试管放在磁力分离器上1-3分钟。当试管保留在分离器上时，除去上清液。从分离器中取出试管，并用1 ml洗涤缓冲液涡旋悬浮30秒。磁分离，除去上清液。
5）按照步骤4所述，用1 ml洗涤缓冲液（或1 M NaCl）洗涤磁珠3-4次。
6）向PuriMagTM磁珠中添加0.5-1ml封闭缓冲液（珠也可以被PBS，pH7.4、0.1％BSA封闭），在室温下孵育1小时或在4°C下孵育过夜。
7）按照步骤4所述，用1ml冷洗涤缓冲液洗涤磁珠3次。
8）将磁珠重悬于pH 7.4、0.1％BSA和0.1％叠氮化物（w / v）的PBS缓冲液中至所需浓度，并保存在4°C下直至使用。不要冻结。
（本磁珠仅供科研使用！）
客户论文
1. Zhao, M., Li, H., Guo, Z., Liu, H., Peng, J., Hu, Y., Fu, B., Li, B., Guo, L., Fu, R. and Lu, Y., 2025. Rapid Single‐Cell Proteomics Using Nanoconfined Enzyme Reactors on a Microscale Digital Microfluidics Platform. Advanced Functional Materials, p.e02142.
