订购信息
货号
规格
MS-AMN001
1 ml
MS-AMN010
10 ml
1. 产品描述
MagStart-Amine 是由超多孔聚合物网络组成的磁性聚合物微载体。通过与各种化学偶联剂对微粒（或生物制品）进行化学活化来共价偶联生物配体。最常用的活化试剂包括N-羟基琥珀酰亚胺（NHS或Sulfo-NHS）和碳二亚胺衍生物（如1-乙基-3-[3-二甲氨基丙基]碳二亚胺盐酸盐），以及双功能交联剂（如戊二醛或1,4-丁二醇二缩水甘油醚）。MagStart微球技术的进步使生物分子可在整个微粒空间渗透和结合，为生物分子的固定化提供了极高的结合能力。
MagStart-Amine微粒极高的官能团密度为生物分子偶联提供了高浓度的反应位点。MagStart-Amine的高结合载量允许减少高活性功能微粒的体积来实现实验方案小型化，进而最大限度地减少所需试剂的体积，从而允许以更小的体积应用固定化配体。MagStart可快速磁分离（<10 秒），通过磁压缩减少了洗涤和洗脱过程中颗粒间隙，从而提高了效率和回收率，强磁性还可防止微粒的意外丢弃而避免样品损失。
Product Specifications
Description
Iron oxide-containing magnetic polymer microspheres
Application
Immobilization of proteins, peptides, enzymes, antibodies and other ligands
Matrix
Proprietary polymer
Core
Iron (II, III) oxide (Magnetite)
Functional group
Primary amine
Binding capacity
≥20 mg/ml (BSA)
Particle Size
~5–10 μm
Formulation
20 mg/ml suspension in 20% ethanol
Stability
pH 3.5~10, 4~60 ℃
Storage
Store at 4~8⁰C until expiry date on label. DO NOT FREEZE!
注意：不当储存、微粒干燥、细菌污染或离心回收可能导致容量/性能的不可逆损失。使用前应充分混匀。
2. 偶联流程
2.1. 样品制备
有效固定配体的重要考虑因素是偶联缓冲液的离子强度和pH值。偶联缓冲液应不含伯胺类化合物（例如Tris）。如偶联的样品中含有可能干扰偶联反应的污染物，例如盐、糖、稳定剂或化合物，则应通过脱盐、超滤或类似技术从样品中去除这些成分。偶联效率取决于配体，可能需要优化才能达到预期的结果。EDC/NHS 活化的蛋白质在加入 MagStart-Amine之前应进行脱盐，因为这些副产物可能会干扰偶联。
注意：所有试剂都应是新鲜制备的，并具有分析级，以确保最佳性能。下面描述的程序、方法、缓冲溶液和配体仅供参考，并非旨在限制。MagStart-Amine与一系列不同的配体固定缓冲液兼容。偶联量取决于配体，应优化条件以确保获得预期结果。
2.2. MagStart-Amine胺平衡
MagStart-Amine以 20 mg/ml悬浮于20% 乙醇液的形式提供。使用前需要去除运输溶液，并在结合缓冲液中平衡微粒。可根据推荐的方案按比例放大或缩小以满足您的要求。当前方案估计结合 ~1 mg 蛋白质。
1）通过涡旋混合3秒将MagStart-Amine彻底重悬，以确保悬浮液均匀。
2）将 50 μl （1 mg） MagStart-Amine转移到新离心管中。我们建议使用低结合试管。
3）将离心管放在磁磁力架上，磁分离。
4）用移液管吸弃上清溶液。
5）在200 μl超纯水或选择用于配体偶联的合适缓冲液中洗涤/平衡微粒。
6）将离心管放在磁力架上，磁分离吸出上清液。
7）重复步骤5和6，再洗涤两次。
8）去除缓冲液后，MagStart-Amine即可进行配体结合的功能化。
2.3. MagStart-Amine的活化
图1. 胺基活化成醛基偶联流程
这里提供了一个戊二醛活化方案示例，用于胺化配体的偶联。戊二醛是一种同双官能团胺反应偶联剂，可用于活化胺功能微粒的表面，并为随后的含胺配体偶联提供醛基。
备注： 本方案可根据使用其他同官能团或杂官能团偶联剂偶联的情况进行调整。戊二醛和其他双官能偶联试剂通常具有危险性和/或毒性，使用时应小心。
1） 在超纯水（或固定化兼容的缓冲液，如 50 mM 三乙醇胺，pH 8.0）中配制 200 μl 的 5%戊二醛活化溶液。
注意：碱性 pH 有利于胺-醛反应，活化/固定化溶液的 pH 应大于 8.0
2）将戊二醛溶液加入 2.2 中洗涤/平衡过的磁微粒中，充分重悬后涡旋 3 秒钟。
3）在室温下搅拌 3 小时。
4）将离心管放在磁力架上，磁分离移去上清液。
5）用 200 μl 超纯水洗涤两次，然后用合适的无胺结合/偶联缓冲液洗涤两次。
6) 在微粒悬液中加入 2-10 mg/ml的配体或蛋白。
2.4蛋白质偶联程序
注意：如用于固定的蛋白含量较低，可能会发生颗粒聚集。如您没有足够的蛋白与珠子偶联，可以将载体蛋白（如BSA或酪蛋白）与感兴趣的蛋白质混合，以提供足够的含量，避免聚集。
1）在合适的偶联缓冲液（不含伯胺，例如三乙醇胺，pH 8.0）中制备待偶联蛋白，并添加到微粒悬液中。
2）在室温下或在4°C下（对于温度敏感的配体），搅拌反应2–24小时。
3）将离心管放在磁力架上，磁分离。
4）吸除上清或保留以供后续测定偶联效率。
5）仅用200μl偶联缓冲液洗涤两次（两次洗涤之间平衡1分钟）。磁分离，吸弃上清。
6）可选：伯胺与醛的偶联导致席夫碱键的形成。可以使用硼氢化钠或氰基硼氢化钠来实现该键的稳定。有关合适的方案，请查阅相关文献。
7） 加入500μl含有过量含胺封闭剂的合适缓冲液（例如PBS中的200mM乙醇胺或天冬氨酸，pH 8.0），并在室温下孵育3小时（或在4⁰C） 以封闭微粒剩余的活化胺基。
8）磁分离，吸弃多余的淬灭剂。
9） 可选：用500μl含0.5–1 M NaCl的缓冲溶液洗涤三次，以去除可能的非共价结合蛋白质和非反应物。磁分离，吸弃洗涤溶液。
10） 在合适体积的缓冲液中清洗/平衡含有固定化配体的微粒，以备储存或进一步应用。
11） 固定化生物制品可与合适的防腐剂（如含0.05%叠氮化钠的磷酸钠缓冲液）在4°C下储存。不要冷冻微粒。
3. 常见问题
问题
可能原因
改善方法
配体不与微粒结合
戊二醛溶液过期
使用新制备的5–10%戊二醛
不正确的结合pH
确保pH>8.0
校准pH计
蛋白质降解
添加蛋白酶抑制剂
样品或溶液中的干扰物阻止结合
确保缓冲液不含伯胺，例如不使用Tris或甘氨酸缓冲液。如含则需脱盐
微粒数量不足
增加颗粒的数量
蛋白质/配体含量过低
使用浓度更高的配体溶液，将总蛋白浓度增加到2~10 mg/ml
