一、概述
醛基活化的琼脂糖磁珠（Magarose-CHO）可以简单有效地将蛋白质共价固定在磁性珠状琼脂糖载体上，为抗体、抗原或其他生物分子的亲和纯化提供了有价值的工具。 活化的载体含有醛官能团，其与蛋白质或其他分子上的伯胺自发反应。 在温和的还原剂氰基硼氢化钠（NaCNBH3）存在下，形成的希夫碱被还原成稳定的仲胺键。无论配体的分子量或pI如何，通过该还原胺化机理偶联的效率通常大于80％。 一旦配体被固定，制备的琼脂糖磁珠可以在磁场下快速用于多轮亲和纯化。
二、产品特性
产品名称
Magarose-CHO
货号
PMAG012
磁珠浓度
25% (v/v) in 0.02% sodium azide
配基密度
~ 50 μmol CHO/ ml磁珠
介质
6%交联磁性琼脂糖
粒径
20-45μm
配体结合
>20 mg IgG/ml磁珠
保存
常温运输，2~8℃保存一年
注：磁珠蛋白结合量与目标蛋白特性相关，此处仅作参考值。
三、使用方法
1. 缓冲液
• Coupling Buffer: 0.1M sodium phosphate, 0.15M NaCl, pH 7.2 (PBS)
• Cyanoborohydride Solution (NaCNBH3): 5M NaCNBH3 in 1M NaOH
Note: Prepare this solution in a fume hood because NaCNBH3 is toxic.
• Quenching Buffer: 1M Tris•HCl, pH 7.4
• Wash Solution: 1M sodium chloride (NaCl)
2. 样品制备（蛋白质溶液）
将1-20mg蛋白质或1-2mg肽溶解于2-3mL Coupling Buffer。对于已存在于溶液中的蛋白质，用偶联缓冲液将样品稀释4倍，或脱盐/透析以偶联缓冲液替代蛋白原有缓冲液。
注意：如果蛋白质溶液含有伯胺（例如Tris或甘氨酸），则必须彻底除去这些化合物，否则它们将与预期的蛋白质偶联反应产生竞争。
3. 偶联方法
A. 蛋白质固定化
1) 将体积2ml（沉降体积）的Magarose-CHO磁珠平衡至室温并磁分离，用3倍磁珠体积的Coupling Buffer洗涤平衡磁珠3分钟，磁分离。洗涤三次。
2) 加入2-4mL蛋白质溶液（溶于Coupling Buffer中）至磁珠中。保存0.1mL制备的样品，用于随后测定偶联效率。
3) 在通风橱中，向反应液中加入40μL氰基硼氢化钠溶液（得到~50mM NaCNBH3）。
4) 在室温下震荡摇动6小时或在4℃下过夜混合反应。磁分离，收集上清，通过比较未结合部分的蛋白质浓度与起始样品来确定偶联效率。
5) 用4mL 的Coupling Buffer洗涤磁珠。
B. 封闭剩余活性位点
1) 用4mL 的Quenching Buffer清洗磁珠。
2) 在通风橱中，向磁珠中加入2mL的Quenching Buffer和40μL的Cyanoborohydride Solution（当与磁珠混合时产生~50mM NaCNBH3）。
3) 振荡反应1h，磁分离收集磁珠。
4) 用2倍磁珠体积的Wash Solution洗涤磁珠三次，最终保存在Coupling Buffer中，备用。
4. 蛋白质亲和纯化的一般方案
注意：该方案使用磁珠体积为2mL。对于其他体积的磁珠，相应地调整所有溶液（例如，样品、洗涤和洗脱）体积。所需的蛋白质样品的量和孵育时间取决于所涉及的亲和系统（例如，抗体-抗原相互作用），并且必须进行优化。
A. 所需的材料
• Binding/Wash Buffer: Phosphate Buffered Saline (PBS), Tris Buffered Saline (TBS) or other buffer that is compatible with the intended affinity interaction.
• Sample: Prepare antigen or other molecule in Binding/Wash Buffer, or dilute sample 1:1 in Binding/Wash Buffer
• Elution Buffer: IgG Elution Buffer or 0.1-0.2M glycine•HCl, pH 2.5-3.0
• Neutralization Buffer (optional): 1mL of high-ionic strength alkaline buffer such as 1M phosphate or 1M Tris; pH 9
B. 亲和纯化程序
1) 将制备的磁珠平衡至室温，磁分离除去上清液。
2) 将样品加入磁珠中，振荡混合30分钟。磁分离，收集上清液，保存用于测定亲和效率。
3) 用12 ml的Binding/Wash Buffer洗涤磁珠除去非特异性吸附的蛋白。磁分离，去除上清液。
4) 加入8mL的Elution Buffer洗脱结合的蛋白质，磁分离，收集上清洗脱液。每1mL收集的洗脱液中加入50μL中和缓冲液。
5) 通过280nm处的吸光度监测洗脱。将感兴趣的组分通过脱盐或透析交换到合适的储存缓冲液中。
C. 磁珠再生和储存
1) 用16mL 的Binding/Wash Buffer洗涤磁珠以除去任何残留的蛋白质并重新激活磁珠。
2) 用8mL含有0.05％叠氮化钠的Binding/Wash Buffer平衡磁珠。
