1. 概述
PuriMagTM G-CHO醛基功能化磁性纳米粒子是均一的、聚合物包覆的超顺磁纳米粒，亲水表面确保磁珠在各种缓冲液中具有出色的分散性、低非特异吸附和易操作性，表面涂覆高密度醛基官能团可永久共价偶联含伯胺的配体。PuriMagTM G-CHO醛基功能化磁珠最适合与蛋白质和小肽的偶合。PuriMagTM G-CHO醛基功能化磁珠可用于偶联肽、蛋白、酶、抗体和氨基修饰的核酸等。PuriMagTM G-CHO醛基功能化磁珠适用于各种磁分离应用，包括亲和力富集、蛋白质纯化、免疫沉淀和细胞分选。
特点和优点：
w 偶联条件：pH 4~10、4~25℃、2~16 h 偶联较高效；
w 水不溶性配体可在终浓度为10~30％的丙酮、二恶烷或醇、二甲基甲酰胺（DMF）或二甲亚砜（DMSO）偶联缓冲液中或在偶联缓冲液中含6M盐酸胍或4 M尿素；
w 稳定的共价键和低水平的配体泄漏；
w 产生可重复使用的免疫亲和基质；
w 低非特异性结合；
w 固定1~50 mg蛋白质或0.1~5mg肽/ g磁珠；
w 应用：抗体、蛋白质/肽、DNA / RNA的纯化；细胞分选；免疫沉淀；
w 偶联方便快速；
偶联原理：
2. 产品信息
Product Specifications
Description
Polymer coated Fe3O4 nanoparticles
Particle Size
200 nm
Number of Beads
~1.7×1010 beads/mg
Matrix
Proprietary polymer
Functional group
Aldehyde group
Group density
~300 µmole / g of Beads
Magnetization
60~70 EMU/g
Formulation
10 mg/ml suspension in DI water
Stability
pH 3.5~10, 4~80 ℃, most organic solvents
Storage
1 year at 4~8 ℃. Do not freeze.
3. 使用方法
注意：以下方案是将将蛋白质和/或肽偶联至PuriMagTM醛基活化磁性纳米粒子的示例。
强烈建议针对具体样本优化磁珠用量。如配体负载太低，则可能导致非特异结合。如配体负载过高，可能会导致空间位阻。建议每g磁珠使用1~50 mg蛋白或0.1~5 mg肽来制成亲和基质。该方案可相应地按比例放大和缩小。
A. 所需材料
1）磁力架（用于手动操作）：用于容纳12个单独的1.5~2ml离心管（Mrack02）；用于容纳2个50 ml离心管或2个15 ml离心管（目录号Mrack03）
2）可溶配体偶联缓冲液：0.1 M sodium phosphate, pH 7.0；
不可溶配体偶联缓冲液：0.1 M sodium phosphate, pH 7, 10-30% acetone, or dioxane, or alcohols, or dimethylformamide (DMF), or dimethylsulfoxide (DMSO) or 6 M Guanidine•HCl or 4 M Urea ；
注意：偶联缓冲液的离子强度对获得更高的偶联效率至关重要。偶联缓冲液应具有最小的离子强度，且不包含任何氨基（如Tris）或其他亲核试剂。洗涤或储存缓冲液可包含氨基。因为氰基硼氢化钠有剧毒，所以请在化学通风橱中准备缓冲溶液。
3）封闭缓冲液：1 M Tris•HCl, 0.05% NaN3, pH 7.4；
4）洗涤缓冲液：1 M NaCl, 0.05% NaN3；
5）氰基硼氢化钠(5 M): NaCNBH3 dissolved in 1 M NaOH
B. 磁珠的准备
注意：将PuriMagTM醛基磁珠按10mg/ml悬浮在水中，分散磁珠4 ℃保存。用前混匀。
1) 将2 mg磁珠转移至EP管中。
2) 将EP管置于磁磁力架上1min，吸弃上清液，用50 ul偶联缓冲液重新悬浮磁珠。
3) 重复步骤2三次。
注意：一旦水化，由于官能团的稳定性，应尽快使用磁珠。
C. 蛋白质偶联
1）如果可溶，将50-200μg蛋白质/肽溶解在100μl可溶性偶联缓冲液中。如果不溶，则溶于100μl不溶偶联缓冲液中。如果样品已经悬浮在其他缓冲液中，请用4倍体积的偶联缓冲液稀释样品，或进行脱盐或透析，以将缓冲液更换为偶联缓冲液。
注意：醛活化的磁珠的偶联效率因配体而异。使用者应根据经验优化配体的浓度。建议蛋白质结合使用0.5~10 mg / ml。对于小肽，配体的浓度应为每毫升至少200μmol配体。
2）在通风橱中，将蛋白质溶液和1μl的NaCNBH3溶液（每毫升总体积10ul，最终浓度50mM）加入珠中。重悬磁珠并通过移液将其很好地混合。在室温或4℃下连续旋转孵育反应过夜。
3）按照步骤B2所述，用1 ml偶联缓冲液洗涤磁珠3次。
4）向PuriMagTM磁珠中添加0.1~0.5ml封闭缓冲液和0.5-1μl的NaCNBH3溶液（每毫升总体积10ul，最终浓度50 mM），在室温下孵育1小时或在4℃下孵育过夜。
5）按照步骤2所述，用1 ml洗涤缓冲液洗涤小珠4-6次。
6）用0.1%的NaN3（w / v）将PuriMagTM磁珠重悬于PBS缓冲液中至所需浓度，并在4℃下储存直至使用。不要冻结。
D. 一般亲和纯化方案
注意：设计通用的纯化DNA或RNA的方案相对简单，因为核酸的生化特性相对一致。但是，设计一种通用的亲和纯化方案非常困难，因为每种蛋白质都有不同的组成和结构。为了获得最佳结果，每个用户都必须为各个应用程序确定最佳工作条件。
1）将最适量的PuriMagTM磁珠转移到离心管中。磁分离1~3分钟，除去上清液。
注意：强烈建议根据粗样品中目标蛋白的量进行滴定，以优化用于每种应用的磁珠的量。所用磁珠过多会导致较高背景，而所用磁珠太少则会导致较低产量。每mg的磁珠通常结合1~20 ug的目标蛋白。
2）取下离心管，用5倍磁珠体积的PBS缓冲液悬浮30秒。磁分离1~3分钟，除去上清。
3）重复步骤2两次
4）将洗涤过的PuriMagTM磁珠加入含有目标蛋白的粗样品中，并在室温或所需温度下孵育1~2小时（较低的温度需要更长的孵育时间）。
5）用5倍磁珠体积的PBS缓冲液或1M NaCl充分洗涤磁珠，直到280 nm洗脱液的吸光度接近背景水平（OD 280 <0.05）。
6）通过适当的方法洗脱目标蛋白，例如低pH（2~4）、高pH（10~12）、高盐、高温、亲和洗脱或在SDS-PAGE上样缓冲液中煮沸。
（本磁珠仅供科研使用！）
