一、概述
Magarose®️是厦门美博泰生物独家注册的琼脂糖磁性微球商标，内含顺磁性纳米颗粒的琼脂糖（6％）交联而成，粒径10~30 μm，保证了高比表面积、易悬浮、快速磁分离等特性，显著加速操作和实验的重现性。琼脂糖离子交换磁珠，可快速、高效、灵敏、特异性地与带相反电荷的生物大分子结合，主要用于蛋白、抗体、多肽和核酸的分离纯化。Magarose®️的离子交换磁珠主要包括强酸性阳离子交换Magarose-SP、弱酸性阳离子交换Magarose-CM、强碱性阴离子交换Magarose-Q和弱碱性阴离子交换Magarose-DEAE，四种离子交换琼脂糖磁珠比较和选择请参见下表。
名称
Magarose®️SP
Magarose®️CM
Magarose®️Q
Magarose®️DEAE
货号
PMAG206
PMAG306
PMAG106
PMAG006
离子
交换
强阳
弱阳
强阴
弱阴
配基
磺丙基
羧甲基
季铵基
二乙基氨基乙基
容量
~0.2mmol H+/ml Beads
~2mmol Cl-/ml Beads
结合
>130mg lysozyme/ml Beads
>100mg lysozyme/ml Beads
>60mg BSA/ml Beads
>50mg BSA/ml Beads
pH稳
定性
2-11
影响
试剂
氧化试剂,阳离子表面活性剂
氧化试剂,阴离子表面活性剂
相容
与所有常用缓冲液相容; 1M NaOH; 8M 尿素; 6M 盐酸胍; 70%乙醇; 30%异丙醇
粒径
10 ~ 30 μm
储存
介质
25%（v/v）in 20% ethanol (Magarose-SP in 0.2M Sodium acetate contain 20% ethanol)
温度
4 ~ 40ºC
应用
生物分子纯化
常温运输，2~8℃保存一年
Magarose-DEAE琼脂糖磁珠(Magarose®️ DEAE Magnetic Agarose Beads)，也称DEAE阴离子交换琼脂糖磁珠、DEAE阴离子交换磁珠、DEAE弱阴离子交换磁珠、DEAE蛋白纯化磁珠、DEAE Ion Exchange Magnetic Agarose Beads或DEAE Ion Exchange Beads，是由二乙胺基乙基(Diethylaminoethyl, DEAE)与琼脂糖磁珠共价偶联而成的一种弱阴离子交换磁珠，可快速、高效、灵敏、特异性地与带负电荷的生物大分子结合，主要用于带负电荷的天然或重组蛋白、抗体、多肽和核酸的分离纯化。
本产品是以DEAE作为功能基团、琼脂糖磁珠为基质的阴离子交换磁珠。DEAE是一种弱碱性的叔胺基团，具有极佳的稳定性，中心N原子带有正电荷，可以吸附样品中带负电荷的蛋白质等，所以这些带负电荷的蛋白质等被留在磁珠上，然后通过提高洗脱液中的盐浓度等方法，将吸附在磁珠上的带负电荷的蛋白质等洗脱下来，从而实现带负电荷的生物大分子的分离纯化。
DEAE琼脂糖磁珠在生物医学领域内应用非常广泛，可以特异性地纯化生物制药或生物工程下游的蛋白、多肽、抗体等；或分离细胞和植物中多糖物质，多用于分离中性、酸性和粘多糖等物质等；还可用于分离大量的基因组DNA以及细菌、细胞裂解液中质粒DNA。本产品可以通过磁性吸附实现快速高效的分离，无需离心操作。本产品的工作原理与操作流程请参考图。
二、产品特性
Ø 磁响应速度快，减少操作时间；
Ø 磁珠具良好分散性和重悬性，提高操作便捷性；
Ø 配基具有良好的物理化学稳定性，提高了实验结果的可靠性及可重复性；
Ø 高结合容量；
三、操作流程（以纯化含BSA蛋白样品为例）
1. 缓冲液的准备
Binding Buffer: 20mM Tris-HCl (pH8.0)
Elution Buffer: 20mM Tris-HCl (pH8.0), 500mM NaCl
注1：所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22μm或0.45μm孔径滤膜过滤，以减少杂质，提高蛋白纯化效率。
注2：推荐的缓冲液适用于大多数蛋白的纯化，也可根据蛋白的稳定性或其自身特点更换其它缓冲体系。对于特殊样品，需自行进行优化，基本原则是低盐浓度上样，高盐浓度洗脱。
注3：对于与本产品结合比较紧密的目的蛋白，可适当地将Elution Buffer中NaCl浓度提高至1M。
2. 蛋白样品的准备
蛋白样品必须处在低盐溶液中，否则会影响其与磁珠的结合。通常推荐把蛋白样品透析至Binding Buffer中，也可以使用脱盐柱进行脱盐处理，或者使用适当孔径的超滤膜以通过超滤去除盐离子。如果样品中盐离子浓度不太高而蛋白浓度比较高，也可以酌情考虑使用Binding Buffer适当进行稀释。
3. Magarose-DEAE琼脂糖磁珠准备
a. 取琼脂糖磁珠并去除上清。用移液器轻轻吹打以充分重悬DEAE琼脂糖磁珠，取20-100μl置于1.5ml离心管中待用。使用前置于磁力架上分离1分钟，去除上清。
b. 洗涤琼脂糖磁珠。加入Binding Buffer至最终体积为约0.5ml，用移液器轻轻吹打重悬DEAE琼脂糖磁珠。于磁力架上分离10秒，去除上清，完成一次洗涤步骤。然后再按照前述洗涤步骤，洗涤2次。最终去除上清，并根据后续的实验目的，用适量的适当溶液(参考步骤3a)重悬DEAE琼脂糖磁珠。
注1：通常，每个样品的琼脂糖磁珠用量约为20-100μl。具体可根据目标蛋白浓度的多少，参考产品主要指标表中琼脂糖磁珠的“Binding capacity”，计算目标蛋白的加入量。根据不同的实验目的，例如可以考虑目标蛋白的加入量为琼脂糖磁珠载量的1-2倍，使琼脂糖磁珠饱和，即把琼脂糖磁珠充分利用，此时通常实验目的是分离纯化；再例如加入琼脂糖磁珠的载量是待分离纯化的目标蛋白的2-3倍，以确保目标蛋白能被充分分离纯化，此时通常实验目的是为了对样品中的目标蛋白进行定量分析。
注2：多个样品时，可以取总琼脂糖磁珠量合并洗涤处理后再平分到各个样品管中，洗涤液用量须相应增加。
注3：须避免待用时间过长，导致磁珠干燥。
4. 目标蛋白的结合
a. 琼脂糖磁珠重悬。接步骤3b，用2倍原始琼脂糖磁珠体积的Binding Buffer重悬DEAE琼脂糖磁珠。
b. 蛋白吸附。加入适量用Binding Buffer稀释的目标蛋白，充分振荡混匀，置于旋转混合仪上，室温孵育30-60分钟。注：如果需要，可以在2-8ºC旋转混合1小时，以防止目标蛋白降解。
c. 磁性分离。将离心管置于磁力架上分离1分钟，去除上清。
d. 洗涤。取1ml Binding Buffer加入分离得到的琼脂糖磁珠中，充分振荡重悬琼脂糖磁珠，将离心管置于磁力架上分离1分钟，去除上清。再重复洗涤1-2次。
5. 洗脱
根据目标蛋白的浓度及后续实验要求，加入100-200μl Elution Buffer，混匀后置于摇床摇动洗脱10分钟，然后置于磁力架上分离1分钟，收集洗脱液转移到新的离心管中，即为目标蛋白。
6. 保存
DEAE琼脂糖磁珠使用20%乙醇为保存液。使用后的DEAE琼脂糖磁珠应储存于20%乙醇中、4ºC密闭保存。为了防止乙醇挥发以及微生物滋生，如有必要可以每3个月更换一次新鲜的保存液。
参考文献：
1. Misiura, Anastasiia, et al. "Single-molecule dynamics reflect IgG conformational changes associated with ion-exchange chromatography." Analytical chemistry 93.32 (2021): 11200-11207. （CM-Agarose beads）
2. Bolivar, Juan M., et al. "Coating of soluble and immobilized enzymes with ionic polymers: full stabilization of the quaternary structure of multimeric enzymes." Biomacromolecules 10.4 (2009): 742-747. （CM-Agarose beads）
3. Jagmann, Nina, Katharina Styp von Rekowski, and Bodo Philipp. "Interactions of bacteria with different mechanisms for chitin degradation result in the formation of a mixed-species biofilm." FEMS microbiology letters 326.1 (2012): 69-75. （CM-Agarose beads）
4. Bragado, Paloma, et al. "TGF-β2 dictates disseminated tumour cell fate in target organs through TGF-β-RIII and p38α/β signalling." Nature cell biology 15.11 (2013): 1351-1361. （CM-Agarose beads）
5. Bertozzini, Elena, et al. "Development of new procedures for the isolation of phytoplankton DNA from fixed samples." Journal of applied phycology 17.3 (2005): 223-229. （Q-Agarose beads）
6. Torres, Rodrigo, et al. "Supports coated with PEI as a new tool in chromatography." Enzyme and microbial technology 39.4 (2006): 711-716. （DEAE-Agarose beads）
7. Riordan, William T., et al. "Salt tolerant membrane adsorbers for robust impurity clearance." Biotechnology progress 25.6 (2009): 1695-1702. （DEAE-Agarose beads）
8. Thien, Katharina M., et al. "Preparation and Characterization of Strong Cation Exchange Agarose Beads: Influence of Crosslinking and Modeling of Performance Data." Advances in Polymer Technology 2025.1 (2025): 9672927. （SP-Agarose beads）
9. Guarise, Cristian, et al. "HA-based dermal filler: Downstream process comparison, impurity quantitation by validated HPLC-MS analysis, and in vivo residence time study." Journal of Applied Biomaterials & Functional Materials 17.3 (2019): 2280800019867075. （SP-Agarose beads）
