1. 概述
点击化学描述了在温和水溶液中快速选择性地“点击”反应成对官能团。 Click Chemistry 的概念已转变为方便、通用且可靠的分子 A 和 B 的两步偶联程序，广泛用于生物科学、药物发现和材料科学。
叠氮化物磁性纳米微粒（PuriMagTM G-N3磁珠）是均一的、聚合物包覆的超顺磁纳米粒，亲水表面确保磁珠在各种缓冲液中具有出色的分散性、低非特异吸附和易操作性，表面涂有高密度叠氮活性基团。PuriMagTM G-N3磁珠是一种有效的磁性纳米粒子，可通过Cu（I）催化的叠氮化物-炔烃环加成（CuAAC）或无Cu（I）的叠氮化物-DBCO通过CLICK反应i共价捕获功能化的蛋白质。目标蛋白质需要在代谢、酶促或化学上带有炔烃标记（Cu（I）催化反应）或DBCO标记（不含Cu（I）的反应）。随后，可以高度严格地洗涤含有共价连接的蛋白质的叠氮化物磁珠，实际上消除了任何非特异性结合的蛋白质。独特的表面意味着在基于蛋白质的系统中低的非特异性结合，并且无需使用表面活性剂即可实现出色的处理效果。这些高结合力的磁珠适合在各种研究和诊断应用中使用，无论您是在实验室规模还是对高通量应用有更严格的要求。叠氮化物磁珠在有机溶剂和高尿素浓度中不稳定。
特点与优势：
w 高结合能力；
w 快速、高效的偶联；
w 亲水性长臂间隔子，可将空间位阻和非特异性结合降至最低；
w 偶联后表面没有电荷；
w 稳定的共价键，配体泄漏最少；
w 低非特异性结合；
w 1~20 mg蛋白质或0.1~2mg肽/ g磁珠；
磁珠偶联原理示意图：
2. 产品信息
Product Specifications
Description
Polymer coated Fe3O4 nanoparticles
Particle Size
200 nm
Number of Beads
~1.7×1010 beads/mg
Matrix
Proprietary polymer
Functional group
Azide group
Group density
~300 µmole / g of Beads
Magnetization
60~70 EMU/g
Formulation
10mg/mL in DI water
Storage
1 year at 2~8 ℃. Do not freeze.
3. 使用方法
A. 所需材料
・t-butyl alcohol (t-BuOH) 12mL
・Dimethylsulfoxide (DMSO) 3mL
・Tris[(1-benzyl-1H-1,2,3-triazol-4-yl)methyl]amine（TBTA） M.W. 530.63 2.7mg
・Copper(Ⅱ)sulfate（CuSO4） M.W. 159.61 16mg
・(＋)-Sodium L-ascorbate M.W. 198.11 20mg
・Methanol （MeOH） 4mL
B. 偶联方法
为了进行筛选，首先需要优化配体在PuriMagTM磁珠上的固定量。您可以通过更改配体的浓度来更改配体的固定量。该实验方案显示了一种将配体固定在叠氮化物磁珠上时以0μM，5μM，25μM和125μM四种不同浓度固定配体的方法。
B-1. 解决方案的准备
1）通过将12mL的t-BuOH与3mL的DMSO混合来制备15mL的t-BuOH / DMSO溶液（t-BuOH：DMSO = 4：1）
2）将配体（化合物）溶解在t-BuOH / DMSO溶液中，并制备200μL的500μM配体溶液。
3）将2.7mg TBTA溶于1mL的t-BuOH / DMSO溶液中，并准备1mL的5mM TBTA溶液。将190μL的t-BuOH / DMSO溶液添加到10μL的5mM TBTA中，并准备200μL的250μMTBTA溶液。
4）将16mg的CuSO4溶于1mL的超纯水中，并准备1mL的100mM CuSO4溶液。将190μL超纯水添加到10μL的100mM CuSO4溶液中，并准备200μL的5mM CuSO4溶液。
5）将20mg（+）-L-抗坏血酸钠溶解在1mL超纯水中，并准备1mL 100mM（+）-L-抗坏血酸钠溶液。向100μM（+）-L-抗坏血酸钠溶液10μL中加入190μL超纯水，并准备200μL的5mM（+）-L-抗坏血酸钠溶液。
6）将4mL以上1）中制备的t-BuOH / DMSO溶液与4mL超纯水混合，制备8mL的t-BuOH / DMSO /超纯水。 （t-BuOH / DMSO溶液：超纯水= 1：1）。
B-2. 固定配体
1）将2.5 mg叠氮化物磁珠添加到四个微管中的每一个中。在室温下磁分离，并丢弃上清液。
2）加入500μl的t-BuOH / DMSO溶液，然后分散磁珠。在室温下磁分离，并丢弃上清液。
3）再重复上述2）两次，然后进行溶剂置换。
4）从顶部溶液叠氮化物磁珠到底部抗坏血酸钠，按如下表所示顺序添加每种反应溶液。在这种情况下，添加250μM的TBTA后，用超声波装置分散PuriMagTM磁珠。然后，添加剩余的解决方案（如下表）。
Concentration (um)
0
5
25
125
Azide beads (mg)
2.5
t-BuOH/DMSO (ul)
250
240
200
500uM ligands (ul)
250uM TBTA (ul)
Ultrapure water (ul)
5mM CuSO4 (ul)
5mM (＋)-Sodium L-ascorbate (ul)
Total (ul)
500
5）通过使用微型管混合器在室温下反应16至20小时。
6）在室温下磁分离，并丢弃上清液。
7）加入500μl的t-BuOH / DMSO /超纯水溶液，并用超声装置分散PuriMagTM磁珠。
8）在室温下磁分离，并丢弃上清液。
9）再重复上述7）至8）两次。 （用t-BuOH / DMSO /超纯水溶液洗涤磁珠，共三遍。）
10）加入500μL50％MeOH，并用超声装置分散磁珠。
11）在室温下磁分离，并丢弃上清液。
12）再重复上述10）至11）两次。 （将磁珠总共洗三遍。）
13）将磁珠分散在100μL的50％MeOH中，并保存在4℃下。
（配体固定磁珠的浓度：0.5 mg / 20μL）
客户发表相关论文：
1. Mao-Hua Gao, et al. Identification and Quantification of 5-Methylcytosine and 5-Hydroxymethylcytosine on Random DNA Sequences by a Nanoconfined Electrochemiluminescence Platform, Analytical Chemistry, 2023, 95, 25, 9598-9604, https://doi.org/10.1021/acs.analchem.3c01252 (Azide磁珠偶联DBCO-核酸探针)
2. 高卯花.基于核酸扩增技术的生物传感器用于表观遗传标志物的分析[D].西南大学,2024.DOI:10.27684/d.cnki.gxndx.2024.002084. (Azide磁珠偶联DBCO-核酸探针)
3. Tang H, Xiong Y, Gan S, Fei L, Guo L, Zhang K, Li H, Fu T, Wu Q, Tan W. CD4 aptamer-engineered cell platforms enhance anti-tumor immunity in triple-negative breast cancer. Cell Biomaterials. 2026 Jan 20;2(1). (Azide磁珠偶联DBCO-核酸探针)
4. Guo Y, Wang Y, Ni Y, Bo B, He J, Zhu Y, Qin A, Zhou X, Du H, Liu Y, Wang T. Iron overload mediates the differential cell fate of astrocytes from neurons and its regulatory mechanisms in ischemic stroke. Advanced science. 2026 Jan;13(4):e07384.. (Azide磁珠点击反应)
