一、概述
Magarose®️是厦门美博泰生物独家注册的琼脂糖磁性微球商标，内含顺磁性纳米颗粒的琼脂糖（6％）交联而成，粒径10~30 μm，保证了高比表面积、易悬浮、快速磁分离等特性，显著加速操作和实验的重现性。琼脂糖离子交换磁珠，可快速、高效、灵敏、特异性地与带相反电荷的生物大分子结合，主要用于蛋白、抗体、多肽和核酸的分离纯化。Magarose®️的疏水作用磁珠主要包括中等疏水Magarose-Butyl、中强疏水Magarose-Phenyl和强疏水Magarose-Octyl三种，三种疏水作用琼脂糖磁珠比较和选择请参见下表。
名称
Magarose-Butyl
Magarose-Phenyl
Magarose-Octyl
货号
PMAG046
PMAG066
PMAG086
疏水
作用
中等
中强
强
配基
丁基
苯基
辛基
密度
~40 μmol/mL
~5 μmol/mL
选择性
中等，通用HIC
高，精细HIC
高，较强HIC
初始上
样盐
1.0–1.5 M
1.5–2 M
洗脱
难度
较容易
较难
方式
0.5–0 M
1.0–0 M
蛋白强
结合
较低
中
高
容量
~20mg HSA/ml
~40mg HSA/ml
~30mg HSA/ml
pH
工作pH3-13，清洗pH2-14
粒径
10 ~ 30 μm
储存
25%（v/v）in 20% ethanol
应用
生物分子纯化
常温运输，2~8℃保存一年
HIC疏水琼脂糖磁珠利用高盐条件下增强的疏水相互作用捕获蛋白，并通过降低盐浓度实现洗脱。与传统柱层析不同，磁珠采用批式混合、磁分离、洗涤和洗脱方式，适合小规模纯化、方法开发及自动化磁珠工作站。
本说明书以Phenyl、Butyl和Octyl三类疏水配基为代表。具体产品的结合容量、最佳盐浓度及CIP条件应以实际批次验证数据和产品技术规格为准。
二、操作流程
1. 缓冲液的准备
用途
推荐配方
备注
平衡/结合液
20 mM Na3PO4, pH 7.0；1.0–2.0 M (NH₄)₂SO₄
首次筛选建议1.5 M
洗涤液
20 mM Na3PO4, pH 7.0；与结合液相同或略低盐
通常2–3次
洗脱液
20 mM Na3PO4, pH 7.0；0–1.0 M (NH₄)₂SO₄
按目标蛋白优化
保存液
20% ethanol
2–8 ℃长期保存优先
再生
按产品验证选择NaOH、胍盐或尿素
不得直接假定所有磁珠耐受
100 μL settled beads → 500 μL平衡液 ×2 → 加500 μL高盐蛋白样品 → 20–30 min温和混合 → 磁分离 → 保留FT → 500 μL高盐洗液 ×2–3 → 100–300 μL低盐洗脱液，5–10 min → 磁分离收集E1 → 必要时重复洗脱 → 再生/CIP → 20% ethanol保存。
取100 μL充分混匀的磁珠悬液。置于磁力架30–60 s，弃去保存液。避免磁珠在空气中长时间干燥。
加入500 μL平衡液，温和混匀5 min；磁分离并弃上清。重复2次。
将蛋白样品调至与结合液相近盐浓度。建议首次筛选最终(NH₄)₂SO₄为1.5 M；根据蛋白溶解性和结合情况调整。
加入500 μL调盐后的样品，与100 μL磁珠混合。4–25 ℃温和旋转或翻转20–30 min。
磁分离30–60 s，收集上清作为Flow-through（FT），用于SDS-PAGE或A280分析。
加入500 μL洗涤液，温和混匀2–5 min；磁分离并弃上清。重复2–3次。
加入100–300 μL低盐洗脱液，温和混匀5–10 min；磁分离，收集洗脱液E1。必要时重复1–2次。
若需重复使用，按验证过的再生方案处理；最终用水或平衡液置换后以20% ethanol保存。
条件
Phenyl
Butyl
Octyl
首次结合盐浓度
1.0→1.5 M
1.5→2.0 M
初始洗脱
0.5 → 0 M
1.0 → 0 M
操作重点
兼顾疏水作用与选择性
适合作为通用初筛介质
关注强结合和洗脱完全性
建议筛选盐
1.0/1.5/2.0 M
1.0/1.5/2.0M
1.5/2.0 M
注：以上为方法开发起始条件，不是所有蛋白的固定条件。HIC表现取决于蛋白表面疏水性、pH、盐种类/浓度、配基结构和配基密度。
推荐先固定磁珠用量和结合条件，再用阶梯盐浓度快速确定目标蛋白的洗脱区间。
组别
结合盐
洗脱盐
建议观察指标
A
1.5 M
1.0 M
是否开始洗脱
B
0.75 M
回收率
C
0.50 M
主峰位置
D
0.25 M
残留蛋白
E
0 M
总回收率
沉降磁珠
建议样品体积
建议洗涤体积
建议单次洗脱体积
50 μL
0.25–0.5 mL
250 μL
50–150 μL
100 μL
0.5–1.0 mL
500 μL
100–300 μL
1 mL
5–10 mL
5 mL
1–3 mL
放大时优先按磁珠沉降体积（settled bead volume）和目标蛋白负载量计算，而不是简单按悬液体积计算。最终负载量应以实测动态/批式结合容量确定。
再生和条件必须通过实际磁珠验证后固化。非磁性琼脂糖HIC介质的公开资料显示具有较好的碱、尿素、胍盐及乙醇耐受性，但磁性产品增加了磁性核心/表面改性步骤，不能未经验证直接套用。
长期保存建议：20% ethanol，2–8 ℃。使用前充分混匀，并用去离子水或适宜平衡液置换保存液。禁止让磁珠长时间完全干燥。
问题
可能原因
建议措施
目标蛋白不上珠
盐浓度不足；配基密度不足；结合时间短
提高盐浓度、增加磁珠量或延长结合时间
非特异蛋白较多
盐浓度过高；洗涤不足
降低结合盐或增加洗涤次数
蛋白洗不下来
疏水作用过强
降低洗脱盐浓度；延长洗脱时间；采用梯度
回收率低
洗脱条件不合适；磁珠损失
增加洗脱次数并检查磁分离回收
磁珠分散困难
干燥、团聚或样品黏度高
避免干燥；温和充分重悬；降低样品黏度
批间差异
粒径/配基密度/磁含量波动
建立D50、CV、配基密度、磁响应及DBC放行指标
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