SP3（single-pot, solid-phase-enhanced sample-preparation）是一种基于顺磁颗粒的蛋白质组预处理工作流程，通过有机溶剂乙醇或乙腈驱动驱动蛋白在羧基或其它亲水性磁珠表面被捕获（如图所示）。标准 SP3流程中，蛋白质通过亲水相互作用机制与磁珠结合，结合了蛋白的磁珠被束缚在溶剂化层，可冲洗去除不需要的污染物，然后在一定条件下洗脱纯化的蛋白质。这种亲水捕获机制类似于亲水相互作用色谱（HILIC）中所涉及的机制，已被广泛证明是分离多种生物分子的有效工具。利用该机制，SP3可实现蛋白质和肽的无偏回收、与大量化学物质（如洗涤剂、离液剂和盐）兼容，可在大范围的输入量上定量回收，促进自下而上的深层蛋白质组学分析。
SP3是一种简单的方案，其中所有步骤都在单管中进行，可快速完成，测试成本低。此外，其适用于机器人自动化，而无需定制硬件。由于这些优势，SP3已被用于大量蛋白质组学实验，从对单个人类卵细胞、果蝇胚胎、免疫细胞、肾和临床肿瘤组织的高灵敏度筛选，到对细胞系、其它模式生物、纯化提取物、染色质中的蛋白质-DNA相互作用以及细胞外基质混合物的深入分析，都受益于SP3方案提供的简单稳健处理。SP3方案可与许多常用的磁珠类型和表面化学相容，如AMPure（Beckman-Colter）和其它羧基或胺基的磁珠（Dynabeads carboxyl、Dynabeads amine、MagReSyn carboxyl、MagReSyn amine和MagReSyn-HILIC）。理论上，任何有亲水涂层的功能化磁珠都应与SP3兼容。SP3方案中最常使用的Sera Mag SpeedBeads（GE Healthcare）提供了测定性能与成本之间最佳平衡。Sera-Mag SpeedBead Carboxylate-Modified [E7] Magnetic Particles (cat. no. 45152105050250，Hydrophilic)和Sera-Mag SpeedBead Carboxylate-Modified [E3] Magnetic Particles (cat. no. 65152105050250，Hydrophobic) 两种类型的SeraMag磁珠的专有涂层在表面亲水性方面差异微小。当在SP3中单独使用时，这两种磁珠类型提供了大致相同的性能，但可以观察到基于亲水性的肽富集效率的微小差异。使用两种类型磁珠的组合来消除任何潜在的差异，能更好保持结果的一致。
厦门普睿迈格生物科技有限公司推出类似SeraMag两种类型的磁珠SP3-H-Carboxyl和SP3-O-Carboxyl，可替代SeraMag磁珠在SP3方案中的应用。
SP3-H-Carboxyl
Cat：SP30045
1ml
Hydrophilic
SP3-O-Carboxyl
Cat：SP30065
Hydrophobic
l 概述
SP3-Carboxyl羧基磁珠是0.4 μm 磁性颗粒，表面有均匀羧基。具有快速的磁响应、高结合载量、大比表面积、高灵敏度，稳定性好，物理完整性好，反应动力学快。SP3-Carboxyl羧基磁珠磁含量为（~ 70%）。
l 典型应用
蛋白组学样品预处理SP3过程应用。
l 处理介绍
使用过程中，应控制颗粒的单分散性和均匀悬浮液，以提供稳健且可重复的性能。将 SP3-Carboxyl羧基磁珠储存在 2~ 8°C 下，如颗粒沉降，则重新悬浮。SP3-Carboxyl羧基磁珠在分子生物学中常用的较宽pH和温度范围内保持稳定，例如胍裂解缓冲液和 PCR 热循环温度。
l 重悬
颗粒不完全重悬会导致检测开发问题。超声重悬颗粒逆转由偶联反应诱导的轻度聚集。
l 灭菌
SP3-Carboxyl羧基磁珠不是无菌的。该制剂含叠氮化钠（0.05%），如防止微生物生长的防腐剂。建议在颗粒长期储存后评估细菌污染。细菌污染可以通过在适当的生长培养基上接种和在72小时后检查平板来评估。珠子可以通过用70%乙醇洗涤来灭菌。不要将珠子高压灭菌，因为这可能导致部分至严重的磁珠聚集。蛋白偶联的微珠不能灭菌。
l 化学相容性
SP3-Carboxyl羧酸盐修饰磁珠是与尿素（6 至 8 M）和 EDTA 相容。
l 防止聚合
为防止颗粒聚集，请避免以下情况：强酸性 pH 值（羧基和磺酸盐基团质子化）的缓冲液、强碱性pH值（胺基去质子化）的缓冲液、冰冻温度、加热、过度涡流、过度超声处理（特别是对于蛋白质标记的磁珠）、微生物。
