订购信息
货号
规格
MS-STV001
1 ml
MS-STV010
10 ml
1. 产品描述
MagStart-Streptavidin磁珠是一种专有的磁性聚合物微粒，为分离或固定包括生物素化生物分子提供了一种简单方便的方法。MagStart-Streptavidin磁珠经特殊处理，使其抵抗trypsin和LysC蛋白酶水解能力提高100倍，避免了基于质谱的蛋白质组学研究中链霉亲和素酶解肽的污染，从而减少了样品处理和MS分析时间，提高整体灵敏度并增加采样深度。MagStart磁珠是一种超多孔聚合物网络，允许分子在整个微粒内渗透和结合，因而具高容量结合目标生物素化生物分子的能力。该产品由磁微粒共价连接重组SA（~55 kDa）组成。高密度官能团可极大增加生物分子负载量，提高稳定性并降低SA浸出的可能性。MagStart-Streptavidin为生物素化寡核苷酸和蛋白质提供了无与伦比的能力。该产品应用包括生物素化核酸和蛋白的分离、细胞分离、DNA/RNA 结合蛋白的分离和免疫测定。与MagReSyn® Streptavidin MS有等同效果。
（抗trypsin和LysC蛋白酶水解能力提高100倍）
Product Specifications
Description
Iron oxide-containing magnetic polymer microspheres
Application
Isolation and purification of biotinylated biomolecule
Matrix
Proprietary polymer
Core
Iron (II, III) oxide (Magnetite)
Functional group
Streptavidin (55 kDa)
Binding capacity
≥3,000 pmoles/mg biotinylated oligonucleotide (24 mer), ≥300 µg/mg biotinylated IgG
Particle Size
~5–10 μm
Formulation
10 mg/ml in 80 mM Phosphate, pH 7.5, 150 mM NaCl, 1.5 mM EDTA, 0.05% Tween® 20, 0.02% sodium azide (NaN3)
Stability
pH 3~10, 4~60 ℃
Storage
Store at 4–8⁰C until expiry date on label DO NOT FREEZE
注意：不当储存、微粒干燥、细菌污染或离心回收可能导致容量/性能的不可逆损失。使用前应充分混匀。
MagStart-Streptavidin微粒极高的官能团密度为生物分子偶联提供了高浓度反应位点。MagStart-Streptavidin高结合载量允许减少高活性功能微粒的体积来实现实验方案小型化，进而最大限度地减少所需试剂的体积，从而允许以更小的体积应用固定化配体。MagStart可快速磁分离（<10 秒），通过磁压缩减少了洗涤和洗脱过程中颗粒间隙，从而提高了效率和回收率，强磁性还可防止微粒的意外丢弃而避免样品损失。
2. 结合和洗脱流程
影响生物素化生物分子结合的因素包括缓冲液成分、pH 值以及污染物/干扰化合物的存在。虽然大分子和小分子都可固定，但生物素化分子的大小可能会影响整体结合能力。因此，可能需要根据您的应用优化所需的磁珠数量。如果磁珠中的生物素化分子达到饱和，则下游应用可获得最佳效果。生物素化分子的结合效率可通过比较偶联反应前后溶液中的分子浓度来确定。MagStart-Streptavidin磁珠与各种常用缓冲液兼容，包括 Tris、Phosphate 和 SSC（sodium saline citrate）。
注意：所有试剂均应新鲜配制并达到分析级，以确保最佳性能。下文所述的程序、方法和缓冲溶液仅作示例，并非限制。MagStart-Streptavidin与一系列常用于捕获和/或固定生物素化分子的缓冲液兼容。可达到的纯度和产量取决于配体，应优化实验条件以确保获得理想的结果。
质谱兼容性说明：如果要对富集的目标物进行进一步的质谱分析，请考虑在初始洗涤步骤后使用其他不含去垢剂的缓冲液，以去除可能干扰质谱分析的残留去垢剂。这可能包括使用不含洗涤剂的初始缓冲液，然后再用挥发性无盐缓冲液（如碳酸氢铵、甲酸铵、碳酸氢铵三乙酯）洗涤。
2.1. MagStart-Streptavidin磁珠的平衡
磁珠以10 mg/ml悬浮液（80 mM Phosphate, pH 7.5, 150 mM NaCl, 1.5 mM EDTA, 0.05% Tween® 20, 0.02% sodium azide (NaN3)）形式供应。使用前，需去除运输溶液，并将微颗粒在结合缓冲液（e.g. 80 mM sodium phosphate, pH 7.4–8.0, 150 mM NaCl, 0.05% Tween® 20）中平衡。 按以下步骤平衡 MagStart-Streptavidin 的等分磁珠，以满足您的要求。每个反应至少需要 10 µl 微颗粒悬浮液，以确保有合适的磁珠量，便于吸入缓冲液。
1) 通过涡旋搅拌或倒置彻底重悬磁珠。
2) 将至少 10 µl 磁珠转移到一个新的离心管中。
3) 将离心管放在磁分离器上至澄清。
4) 用移液管吸出运输溶液。
5) 用 200 µl 结合缓冲液洗涤/平衡磁珠。
6) 将离心管放在磁分离器上至澄清。
7) 用移液管吸出结合缓冲液，重复步骤 5 和 6 两次，共清洗三次。
8) 去除步骤 5 中的结合缓冲液后，MagStart-Streptavidin磁珠即可用于结合生物素化分子。
2.2. 生物素化寡核苷酸的固定化
1） 计算应用所需的MagStart链霉亲和素磁珠的量，并转移到干净的离心管中。
2） 例如，10µl链霉亲和素磁珠（100µg）足以结合≥300 pmol的生物素化寡核苷酸（24 mer）。
3） 将生物素化寡核苷酸添加到2.1中平衡的链霉亲和素磁珠中。将总反应体积调整至至少100µl与结合缓冲液混合，并连续充分混合离心管。
4） 使生物素化寡核苷酸在室温下与磁珠结合15-30分钟。
5） 将离心管放在磁分离器上至澄清。
6） 用移液管吸取偶联上清液。上清液可丢弃或通过差异来量化磁珠上结合的生物素化寡核苷酸量。
7） 通过分别用3×200µl结合缓冲液洗涤磁珠，从磁珠中去除任何未结合的寡核苷酸。
8） 每次清洗后，将离心管放在磁力架上至澄清。
9） 用移液管移走上清液。
10）可以丢弃来自洗涤步骤的上清液或将其与偶联上清液合并用于定量。
2.3. 生物素化蛋白质的固定化
1） 计算固定感兴趣的蛋白质所需的链霉亲和素磁珠的量。如10µl 磁珠（100µg）足以结合约≥30µg生物素化IgG。
2） 将生物素化蛋白添加到2.1中平衡的磁珠中。用结合缓冲液将总反应体积调节至至少100μl，并连续充分混合。
3） 使生物素化的蛋白质在室温下与磁珠结合15-30分钟。
4） 将离心管放在磁分离器上至澄清。
5） 用移液管除去偶联上清液。上清液可丢弃或通过差异来量化结合在磁珠上的生物素化蛋白的量。
6） 用3 × 200µl结合缓冲液洗涤，从磁珠中去除任何未结合的蛋白质。
7） 将离心管放在磁分离器上至澄清。
8） 用移液管吸取上清液。
9） 洗涤步骤的上清液可以丢弃或与偶联上清液合并在一起进行定量。
3. 试剂适应性
MagStart-Streptavidin 磁珠相容组成如下:
Reagent
Concentration
Tween® 20
≤1%
Tris, Saline Sodium Citrate (SSC), Sodium phosphate
≤100 mM
NaCl
≤2 M
4. 常见问题
问题
可能原因
改善方法
生物素化的生物分子不会像预期的那样与磁珠结合
反应时间不足
将反应时间扩充到至少15-30分钟
不正确的结合pH
检查和调整结合液pH7.5-8.0
样品或溶液中的干扰物阻止结合
将样品脱盐或透析到推荐的结合液中，以去除培养基成分/其他污染物
微粒数不足
增加颗粒的数量
生物分子浓度过低
增加生物素化分子浓度
生物素化不够
考虑目标分子未正确生物素化
生物分子的非特异吸附
离子或静电作用导致的非特异吸附
增加结合、洗涤、洗脱缓冲液中的NaCl浓度；增加结合洗涤液中吐温20浓度
洗涤不充分
增加洗涤次数、洗涤液体积和平衡时间
