1. 概述
直链淀粉磁珠（PuriMag Si-Amylose）是通过将Amylose共价偶联到纳米超顺磁珠表面，并可在较宽pH范围内稳定不泄漏。PuriMag Si-Amylose 磁珠具有快速磁响应性、高蛋白结合能力和低非特异性吸附，可快速有效地从细胞培养上清中纯化MBP（麦芽糖结合蛋白）融合蛋白。将珠子简单地加入到细胞培养物上清液中， MBP融合蛋白质将与珠子结合。在洗去未结合的杂蛋白后，MBP融合蛋白可从磁珠上洗脱下来。或者结合蛋白质的磁珠也可直接用于下游pull down实验。该过程可手动完成或完全自动化以实现高通量应用。
2. 产品规格
• 直径：400 nm
• pH稳定性：pH 3-13
• 磁响应率：50〜70 emu / g
• 储存溶剂：20％乙醇
• 结合能力：10μgMBP5 * - 肌球蛋白ΔSal融合蛋白/ mg磁性
• 珠子浓度：10 mg/ml
• 储存：2-8 ℃，2年
3. 纯化蛋白方案
以下方案供使用PuriMag Si-Amylose磁珠纯化MBP融合蛋白的一般流程，用户可根据具体应用对其进行修改。
A. 使用材料
1. 结合/洗涤缓冲液：20mM Tris-HCl，0.2M NaCl，1mM EDTA，1mM DTT，pH7.4
2. 洗脱缓冲液：10mM 麦芽糖（溶解在结合/洗涤缓冲液）
3. 磁性支架或96孔磁珠自动化处理器
B. 分离MBP融合蛋白
1. 使用前，彻底混匀磁珠。
2. 将100μl磁珠（1mg）置于1.5ml无菌微量离心管中。
3. 将试管置于磁力架上，收集磁珠并丢弃上清液。
4. 使用结合/洗涤缓冲液（每次500μl）洗涤磁珠两次，收集磁珠并丢弃上清液。
5. 将200-500μl细胞培养上清液加入磁珠中，充分混合在4℃旋转器上孵育1.0小时。
6. 如需要，用磁铁收集珠子并保存上清液进行分析。
7. 用结合/洗涤缓冲液（每次500μl）洗涤磁珠三次，去除非特异吸附杂蛋白。
8. 结合蛋白的磁珠可直接用于下游pulld own实验。或者将MBP融合蛋白从磁珠上洗脱下来。将磁珠悬浮在50μl洗脱缓冲液中，在4℃旋转器上孵育10分钟。磁分离后，将上清液转移到干净的微量离心管中。如需要，重复此步骤一次。合并来自多次洗脱的洗脱液。纯化的蛋白即可使用。
磁珠客户发表论文：
1. Huang, J., Yang, L., Yang, L. et al. Stigma receptors control intraspecies and interspecies barriers in Brassicaceae. Nature 614, 303–308 (2023). https://doi.org/10.1038/s41586-022-05640-x （Si-Amylose磁珠钓取蛋白）
